[发明专利]一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物科技应用技术领域，涉及一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法。

背景技术

白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen，CD14)是一种存在于单核细胞、巨噬细胞等细胞表面的分化抗原，为体内介导脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)生物效应的重要受体之一。白细胞分化抗原14(CD14)包括膜结合型白细胞分化抗原14(membrane bound CD14，mCD14)和可溶性白细胞分化抗原14(soluble CD14，sCD14)两种形式：膜结合型白细胞分化抗原14(mCD14)是分子量为55千道尔顿(KD)的糖蛋白，其C-末端借助糖基磷酯酰肌醇(glucose phosphatidylinositol，GPI)结构锚附于细胞膜表面；可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)分子有49KD和55KD两种形式，缺乏糖基磷酯酰肌醇(GPI)锚。膜结合型白细胞分化抗原14(mCD14)是由含有白细胞分化抗原14(CD14)基因的单核细胞、巨噬细胞，自行转录、翻译蛋白质多肽链，在高尔基复合体内糖化后，其羧基端再与磷酯酰肌醇(phosphatidylinositol，PI)结合，并由磷酯酰肌醇的磷脂部分与细胞膜连接。生理条件下，膜结合型白细胞分化抗原14(mCD14)主要表达于成熟的单核巨噬细胞，微弱表达于中性粒细胞、肾小球膜细胞、乳房细胞和B细胞，mCD14介导脂多糖对这些细胞的激活作用。

内毒素是革兰氏阴性菌细胞外膜的组成部分，其主要成分为脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，脂多糖一旦进入体内，将诱导机体产生多种炎症介质的反应，导致机体的严重损伤。脂多糖是一类特殊类型的磷脂,对哺乳类动物具有广泛的生物学作用。根据化学结构，可以将脂多糖分为二大类，即光滑型脂多糖(Smooth Form LPS，S-LPS)和粗糙型脂多糖(Rough Form LPS，R-LPS)。这二类脂多糖在化学结构、实验室制备及生物学活性等方面具有显著差别。建立鉴别光滑型脂多糖(S-LPS)与粗糙型脂多糖(R-LPS)的方法，最终可以应用于临床细菌感染性疾病的诊断和治疗

在革兰氏阴性细菌引起的炎症反应过程中，脂多糖受体起着关键作用，是脂多糖作用的重要门户。白细胞分化抗原14(CD14)被认为是脂多糖信号转导中最重要的脂多糖受体，白细胞分化抗原14在介导脂多糖激活靶细胞及炎症反应中起关键作用；研究表明，通过抑制白细胞分化抗原14破坏脂多糖所激活的靶细胞炎症反应是一个可行的治疗方法。

核糖核酸干扰(RNA interference，RNAi)是指由特定双链核糖核酸(double stranded RNA，dsRNA)引发同源信使核糖核酸(messenger RNA，mRNA)降解的转录后基因静默机制。这类特定双链核糖核酸被裂解成小（干扰）核糖核酸分子(siRNAs)，并能导致同源信使核糖核酸(mRNA)在核糖核酸诱导的静默复合体(RNA-induced silencing complex，RISC)作用下降解。核糖核酸干扰(RNAi，Ribonucleic acid interference)RNA是目前简单而高效地阻断哺乳动物细胞内特异基因表达的最有效方法之一，可达到基因敲除效果，且安全性好。但对于核糖核酸干扰(RNAi)来说，并不是所有针对靶基因信使核糖核酸(mRNA)序列随机合成的小核糖核酸分子(siRNAs)都能引起有效的基因沉默，干扰靶序列的选择对干扰效率的影响是至关重要的。因此，对能有效抑制特异基因表达的小核糖核酸分子(siRNAs)的筛选是应用核糖核酸干扰(RNAi)技术进行基因功能、基因治疗等相关研究的重要基础。

酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。