[发明专利]碱性磷酸酶标记信号放大系统

权利要求书

1.一种碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于：该系统包括：

（1）碱性磷酸酶底物，其结构通式如下式（I）所示：

其中：

A是烷基，烯烃基或炔烃基中的一种；

R为H，C1-C4烷基，C5-C10环烷基中的一种；

n是1-8的整数；

（2）碱性磷酸酶标记信号放大组合物，包括结构通式为式（I）的碱性磷酸酶底物，醇类氧化酶、醇类脱氢酶及NADH；底物在碱性磷酸酶作用下产生游离的磷酸及相应的醇化合物，醇化合物在氧气参与下可被醇氧化酶氧化成醛或酮化合物，同时生成H₂O₂，醛和酮化物在NADH存在下经醇脱氢酶作用又还原成醇化物，从而形成循环系统。

2.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于：式（I）中所述的烷基，烯烃基和炔烃基为C1-10的烷基、C2-10的烯烃基或炔烃基；或C1-10的烷基、C2-10的烯烃基或炔烃基的取代基。

3.根据权利要求2所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于：所述的C1-10的烷基、C2-10的烯烃基或炔烃基的取代基包括卤代，=O，=N-CN，=N-OR，=NR，OR，NR₂，SR,SO₂R，SO₂NR₂，NRSO₂R，NRCONR₂，NRCOOR，NRCOR，CN，COOR，CONR₂，OOCR，COR和NO₂，其中每个R可以是H，C1-C8烷基，C2-C8杂烷，C3-C8环烷，C4-C10杂环烷，C1-C8酰基，C2-C8杂酰基，C2-C8烯，C2-C8杂卤代烯烃，C2-C8炔，C2-C8杂炔或C5-C10杂环；其中R也可被卤代,=O，=N-CN，=N-OR’，=NR’，OR’，NR’₂，SR’，SO₂R’，SO₂NR’₂，NR’SO₂R’，NR’CONR’₂，NR’COOR’，NR’COR’，CN，COOR’，CONR’₂，OOCR’，COR’和NO₂取代，其中每个R’可以是H，C1-C8烷基，C2-C8杂烷，C3-C8环烷，C4-C10杂环烷，C1-C8酰基，C2-C8杂酰基，C2-C8烯，C2-C8杂卤代烯烃，C2-C8炔，C2-C8杂炔或C5-C10杂环取代，每个取代又可被适宜的取代基取代；如果取代基R或R′在相同或相邻的原子上，两者可形成5-8碳的环状化合物，并且环上可以包含一个杂原子。

4.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于，所述的碱性磷酸酶标记信号放大组合物，包括了碱性磷酸酶底物，具体还包括以下几项：

（1）醇类氧化酶，能分别将碱性磷酸酶水解碱性磷酸酶底物生成的伯醇或叔醇氧化成相应的醛或酮化合物；

（2）醇类脱氢酶，能将生成的醛和酮化合物转化为醇化合物；

（3）参与还原反应的共反应物——NADH，其与醇类脱氢酶共同作用能将生成的醛和酮化物转化为醇化物；

（4）用于检测副产物H₂O₂的试剂。

5.根据权利要求4所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于：所述的醇类氧化酶包括醇氧化酶（EC1.1.3.13）或二级醇氧化酶（EC1.1.3.18）；所述的醇氧化酶（EC1.1.3.13）包括但不限于自然提取、工程菌表达制备及基团修饰处理的乙醇氧化酶；二级醇氧化酶（EC1.1.3.18）包括但不限于自然提取、工程菌表达制备及基团修饰处理的二级醇氧化酶；

所述的醇类脱氢酶包括醇脱氢酶（EC1.1.1.1）或S-二级醇脱氢酶（EC1.1.1.B3）；所述的S-二级醇脱氢酶（EC1.1.1.B3）包括但不限于自然提取、工程菌表达制备的及基团修饰处理的S-二级醇脱氢酶。

6.根据权利要求4所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于：所述的NADH包括还原型的NAD⁺或合适的衍生物——乙酰-NADH或硫代-NADH。