[发明专利]对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗及其应用

权利要求书

1.对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗，其特征在于：所述多价载体疫苗是含有对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19基因片段或VP28基因片段的重组鳗弧菌，所述重组鳗弧菌的细胞表面有VP19蛋白或VP28蛋白存在。

2.如权利要求1所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗，其特征在于：所述重组鳗弧菌由基于冰核蛋白INP表面展示系统的重组质粒转化一株非致病性鳗弧菌（Vibrio anguillarum）野生株HT5301获得，所述非致病性鳗弧菌（Vibrio anguillarum）野生株HT5301的分类命名是弧菌科弧菌属鳗弧菌，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2012161。

3.如权利要求1所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗株，其特征在于：所述重组鳗弧菌的细胞内含有基于冰核蛋白INP表面展示系统的重组质粒pHTNVP19，该重组质粒pHTNVP19含有氨苄青霉素抗性基因和用于抗原蛋白表面展示所用的冰核蛋白INP基因，在INP基因后连有VP19基因片段，可实现INP-VP19蛋白的融合表达。

4.如权利要求1所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗株，其特征在于：所述重组鳗弧菌的细胞内含有基于冰核蛋白INP表面展示系统的重组质粒pHTNVP28，该重组质粒pHTNVP28含有氨苄青霉素抗性基因和用于抗原蛋白表面展示所用的冰核蛋白INP基因，在INP基因后连有VP28基因片段，可实现INP-VP28蛋白的融合表达。

5.如权利要求3或4所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗，其特征在于：所述VP19基因片段、VP28基因片段均是连接在冰核蛋白INP的N端；所述VP19基因片段是WSSV VP19基因序列（SEQ ID NO:1）全长的编码序列，所述VP28基因片段是WSSV VP28基因序列（SEQ ID NO:2）从第30个氨基酸开始到结束的编码序列。

6.权利要求1~5任一项所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗在预防由白斑综合症病毒WSSV导致的对虾白斑综合症和预防由鳗弧菌导致的对虾弧菌病方面的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述多价载体疫苗通过浸泡和口服给药途径免疫接种对虾；通过浸泡方式给药免疫时，浸泡浓度为1×10⁵~1×10⁶CFU/ml，浸泡时间15min；通过口服方式给药免疫时，投喂剂量为1×10⁹~4×10⁹CFU/克饲料，连续投喂7天。

8.如权利要求1~5任一项所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗，其特征在于：所述多价载体疫苗通过发酵培养和冻干制备得到冻干疫苗制品。

9.如权利要求8所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗，其特征在于：在发酵培养过程中，所述培养基采用LB培养基或TSB培养基，培养温度22°C~28°C；在冻干制备过程中，所述多价载体疫苗添加有冻干保护剂，所述冻干保护剂包括海藻糖和脱脂奶粉，它们的添加量是每100g多价载体疫苗中添加3.5g的海藻糖和5g的脱脂奶粉，冻干疫苗制品的活菌含量不低于50亿/毫升。

10.如权利要求9所述的对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗，其特征在于：所述LB培养基或TSB培养基按20mg/L的比例补加苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，以使蛋白产量足够。