[发明专利]对虾白斑综合症病毒多价载体疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及载体疫苗技术，具体地说是对虾白斑综合症病毒（WSSV）多价载体疫苗及其应用，属于基因生物工程技术领域。具体地说是表面展示对虾白斑综合症病毒抗原蛋白的鳗弧菌重组载体疫苗及应用。 

背景技术

对虾是主要在亚洲和拉丁美洲特别为出口目的生产的高价值水产品，目前主要的养殖品种为南美白对虾、斑节对虾和中国对虾，其中南美白对虾已成为我国目前养殖量最大的对虾品种，年产量达70余万吨，位居世界第一。然而在过去的近20年里，主要由于弧菌病和病毒病，对虾养殖生产中出现了相当严重的问题，其中白斑综合症病毒（White spot syndrome virus,WSSV）、桃拉病毒（Taura Syndrome Virus,TSV）和弧菌为重要病害元凶。对全球对虾养殖业来说，白斑综合症病毒被认为是最为严重的病毒病原之一，每年的白斑病发病率高达40%以上，并可在3-10天内造成全球每年高达30亿美元的对虾病害损失。我国所有对虾养殖区域基本都已爆发了日趋严重的白斑病。细菌重大病害主要为弧菌属病原引发的弧菌病（Vibriosis），危害全球所有养殖对虾品种，多发于6-9月间。在虾苗孵育阶段临床症状主要表现为发光，肠道破坏，病害爆发时可一夜间导致100％死亡率。这些重大病害已成为我国和全球对虾养殖业健康可持续发展的严重制约因素。 

白斑综合症病毒（WSSV）是引起对虾白斑病的元凶，它属Nimaviridae科Whispovirus属的代表种，是一种无包涵体、有囊膜的杆状病毒（van Hulten，et al.2001.Virology.286(1):1-22）。它能高致死率地侵染绝大多数种类的对虾，此外还可以侵染淡水及海洋生态中的多种蟹类、龙虾类、端足类等甲壳纲动物，具有较广泛的宿主范围，给水产养殖造成严重的经济损失。因此针对对虾白斑综合症病毒的防治技术开发受到广泛关注。 

近年的研究表明，白斑综合症病毒(WSSV)的重组囊膜蛋白可以诱导对虾产生抗病保护效应。目前，国内外在研究WSSV疫苗上取得了很大的进展。已研发的包括有核酸类疫苗（Rout N,et al.2007.Vaccine.25:2778-2786;Rajeshkumar S,et al.2009.26(3):429-437等）和重组疫苗（Witteveldt J,et al.2004b.J Virol.78:2057-2061;Witteveldt J,et al.2004a.Fish Shellfish Immunol.16:571-579;Mavichak R.et al.2010.J Fish Dis.33:69-74等）。Witteveldt J等发现VP28的亚单位疫苗对对虾免受WSSV的感染起到重要的保护作用，其免疫保护率达到70%。除此以外，Yu Mi Ha等人发现WSSV的囊膜蛋白VP19在WSSV侵染对虾时起到重要作用（Yu Mi Ha，et al.2008.J Env Bio,29(4):513-517）。宁德刚等人（D.Ning，et al.2011 Journal of Applied Microbiology 111:1327-1336）通过基于Cot衣壳蛋白基因展示系统将VP28蛋白展示到枯草芽孢杆菌的表面，通过口服的方式免疫龙虾，其免疫保护率达到80%。2011年美国Harrisvaccine公司证明在注射的条件下VP19的免疫保护率要优于VP28，VP19的免疫保护率是70%而VP28的免疫保护率是40%（J.Dustion Loy，DVM global aquaculture advocate May/June 2011）。而Jeroen Witteveldt通过研究发现，VP19和VP28在不同的给药方式下，其免疫保护率是有区别的，在注射的条件下VP19的免疫保护率高于VP28；在口服的条件下VP28的免疫保护率高于VP19；当两个共同作用的时候其免疫保护效果要低于单个使用。基于上述前人的研究结果，本发明使用的WSSV的抗原蛋白是VP28和VP19。 

但目前的研究工作也存在着很多不足之处，其中一个主要方面在于：现有研究工作所使用的细菌载体非常单一，主要为枯草芽孢杆菌，世界范围内，以天然无毒或人工减毒的水产病原菌为载体进行对虾多价载体疫苗开发还处于空白。