[发明专利]一种测定糖化血红蛋白百分比的试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药试剂，具体的说是一种测定糖化血红蛋白百分比的试剂。

背景技术

由于血液中的糖化血红蛋白反映了生物中血糖值过去的情况，因此被作为糖尿病的诊断和治疗的重要指标。对于检测糖化血红蛋白，例如：HPLC、电泳法、免疫法等。但是对于上述的HPLC法、电泳法，需要专用的仪器设备，检测成本高昂，目前对于我国普及面不大，对于上述的免疫法等，成本虽然比较低，但是存在准确度和灵敏度低的缺点。

因此，对于测定糖化血红蛋白，酶法具备了不需要专用的仪器，检测成本低，且通过特异性蛋白酶对糖化血红蛋白切断为糖化多肽及糖化氨基酸，并通过特异性的氧化还原反应进行显色测定，因此准确度及灵敏度都较高，稳定性能较好。

采用的酶法测定糖化血红蛋白百分比的方法，即首先，蛋白酶作用于糖化血红蛋白，通过切下含β链N基末端的糖化缬氨酸或糖化多肽片段，在通过果糖基氨基酸氧化酶（FAOD）作用于上述切断的糖化片段，产生过氧化氢。通过过氧化物酶的氧化作用和显色剂的显色反应得到的过氧化氢的量与上述糖化血红蛋白的百分比成正比例关系。目前测定糖化血红蛋白百分比用的比较多的方法是在双通道测定糖化血红蛋白百分比，即反应分两步进行，第一步反应是测定样本中的总血红蛋白的量，第二步反应是测定样本中糖化血红蛋白的量，最后得到两步反应后数值的比值，即糖化血红蛋白的百分比，这种形式对于仪器需要占用两个通道，这样的方法对于医院的应用带来了很多的不便。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种测定糖化血红蛋白百分比的试剂。

为了实现上述目的，本发明设计了一种测定糖化血红蛋白百分比的试剂，其特征在于：由以下物质组成，

（a）从血液样品中的红细胞释放血红蛋白的溶解缓冲剂；

（b）能够切断糖化血红蛋白β链N基末端的糖化缬氨酸或糖化多肽片段的蛋白酶；

（c）能够氧化并消除样本中干扰物质的氧化剂；

（d）能够将血红蛋白变性并且能够加快蛋白酶反应速率的氧化剂；

（e）能够加快蛋白酶反应速率的加速反应剂；

（f）与物质a中能够切断糖化血红蛋白β链N基末端的糖化缬氨酸或糖化多肽片段进行氧化还原反应的果糖基氨基酸氧化酶；

（g）能够与产生的过氧化氢发生显色反应的显色剂；

（h）能够催化过氧化氢和显色剂发生显色反应的过氧化物酶。

所述物质a中的缓冲剂为TritonX-100、Tween-20、Brij35中的一种；添加的浓度为0.1%-1%的重量，室温下静置3-10分钟即可溶血完全。

所述物质b中的蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、蛋白酶K、猪胰蛋白酶、氨肽酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶E、中性蛋白酶、弹性蛋白酶中的一种；蛋白酶的浓度范围为100-5000KU/L。

所述物质c中的氧化剂是戴斯马丁氧化剂或者高碘酸钠，其浓度范围为0.5-10mmol/L。

所述的物质d中的氧化剂为四唑鎓盐。

所述的四唑鎓盐是2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑盐、2-（4-碘苯基）-3-（2，4-二硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑盐、2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑盐、2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基-2H-四唑盐、2，5-二苯基-3-（间甲苯基）四唑盐、2，5-二苯基-3-（对甲苯基）四唑盐、2，3-二苯基-5-（2-噻吩基）四唑盐、铁氰化钾、碘酸钾。其中优选2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑盐、2-（4-碘苯基）-3-（2，4-二硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯基）-2H-四唑盐中的一种，其浓度范围为0.05-10mmol/L。

所述物质e中的加速反应剂为葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、正十二烷基-β-D-麦芽糖、亚硝酸钾、亚硝酸钠、硝基苯中的一种，其浓度范围为0.01-1mmol/L。

所述物质f中果糖基氨基酸氧化酶是纯化的或是重组产生的。

所述果糖基氨基酸氧化酶为作用于a-氨基被糖化的氨基酸或肽，同时催化产生过氧化氢的酶，其浓度为0.2-100KU/L。

所述物质h中的过氧化物酶为辣根过氧化物酶，其浓度范围为20-800KU/L。