[发明专利]蛋白C（PC）测定试剂盒（发色底物法）

权利要求书

1.一种检测蛋白C活性的试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂；所述R1试剂包含一种蛋白C激活剂，所述蛋白C激活剂自中国秦岭蝮蛇蛇毒中提取，其SDS-PAGE电泳呈一条带，分子量在40-45KD之间；所述R2试剂为包含发色底物的试剂。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白C激活剂自中国秦岭蝮蛇蛇毒中提取的方法如下：

步骤1：中国秦岭蝮蛇蛇毒干粉用磷酸盐缓冲液溶解后，采用DEAE-琼脂糖快流速阴离子交换柱进行层析，用含0～0.5mol/L氯化钠的磷酸盐缓冲液进行线性梯度洗脱，检测波长为280nm，收集并合并活性峰洗脱液；

步骤2：将步骤1所得活性峰洗脱液经透析除盐后，采用SP-Sephadex C50阳离子交换柱进行层析，用含0.1～0.6mol/L氯化钠的醋酸盐缓冲液进行线性梯度洗脱，检测波长为280nm，收集并合并活性峰洗脱液；

步骤3：步骤2所得活性峰洗脱液经浓缩、透析除盐后，采用Sephadex G-100柱进行过滤层析，磷酸盐缓冲液洗脱，收集活性峰洗脱液，即为所述蛋白C激活剂。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤1所述磷酸盐缓冲液的pH值为7～8、浓度为10～25mM。

4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤1所述中国秦岭蝮蛇蛇毒干粉与用于溶解蛇毒干粉的磷酸盐缓冲液的质量体积比以g/ml计为0.5～1.5:10。

5.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤2所述醋酸盐缓冲液的pH值为5～6、浓度为30～60mM。

6.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤3所述磷酸盐缓冲液的pH值为7～8、浓度为10～30mM。

7.如权利要求1-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂和R2试剂还分别包含缓冲液、稳定剂、赋形剂和防腐剂。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中所述蛋白C激活剂的工作浓度为0.07～0.36mg/ml。

9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中发色底物为PyroGlu-Pro-Arg-pNA·HCl，工作浓度为0.1～0.5mg/ml。

10.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂缓冲液为Tris缓冲液或HEPES缓冲液。