[发明专利]N-乙酰半胱氨酸对中央记忆性T细胞的绝对数量在体外扩增上的应用

说明书

技术领域

本发明涉及N-乙酰半胱氨酸对中央记忆性T细胞的绝对数量在体外扩增上的应用。

背景技术

Ｎ-乙酰半胱氨酸（N-Acetylcysteine，简称NAC）是细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的前体，NAC分子式:C₅H₉NO₃S,相对分子质量:163·20。NAC曾作为一种黏液溶解剂多年来应用于治疗各种呼吸系统疾病。近年又发现NAC具有肝细胞保护作用而用于治疗多种原因引起的肝细胞损害,其中NAC治疗对乙酰氨基酚致急性肝功能衰竭已获得美国FDA批准。近年研究显示,NAC具有多种药理作用,它可以直接清除自由基,增加机体抗氧化应激能力,并可减少炎性细胞因子、趋化因子和黏附分子产生。此外,NAC还可以调节机体免疫状态和细胞凋亡程序。许多文献和实验结果均显示NAC作为一种含活性巯基抗氧化剂，无毒副作用，具备较高的生物安全性，除医疗用途之外，也广泛应用于细胞系的培养，可有效地维持细胞系的存活。

由于T细胞在免疫系统中起着重要的作用，越来越多的研究小组尝试运用T细胞的过继治疗的方式来进行肿瘤治疗。中央记忆性T细胞（TCM）具有自我更新的能力，而且应答时间短，作用时间长，对人体的副作用小。今年来，多个研究组报道，发现具有记忆功能的T细胞回输肿瘤患者体内以后，治疗效果明显并且持续治疗时间长，可以减少患者的痛苦以及降低细胞体外培养次数过多的生物安全风险。但是在人体内相对数量较少，且由于体外长时间培养的T细胞会使T细胞失去活力，绝大部分细胞分化为终末分化的效应细胞，使得回输体内的T细胞存活时间过短，无法产生持续的杀伤肿瘤细胞的功能，因此如何在体外获得大量的记忆性T细胞是细胞免疫治疗的一个新的研究热点。

目前，国外的许多研究小组通过构建人工抗原提呈细胞，将其应用于T细胞的体外培养，提高T细胞的存活时间，用于过继免疫治疗，但要获得足够量的T细胞，技术要求复杂，培养的成功率较低。在进行T细胞治疗时，主要策略是先通过克隆扩增，得到足够量的具有杀伤功能的T细胞，可以与DC等提呈细胞共培养，也可以直接用相关肿瘤抗原刺激细胞克隆扩增，得到具有特定肿瘤抗原特异性的T细胞。此种办法培养得到的T细胞未经过任何转基因修饰，安全性较高。但这种肿瘤高反应性的细胞需要扩增至临床需要的10⁹－10¹¹治疗剂量的数量数，过程持续时间比较长，对于肿瘤患者来说时间也是一个需要更多考虑的因素。而且体外培养的时间长，细胞容易变老，活力下降，多为终末分化的细胞，在体外有较好的效果，但是在体内存活时间较短，治疗效果受影响。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供N-乙酰半胱氨酸对中央记忆性T细胞的绝对数量在体外扩增上的应用。

本发明涉及N-乙酰半胱氨酸（NAC）对中央记忆性T细胞的绝对数量在体外扩增上的应用。

本发明所述中央记忆性T细胞为CD4⁺ T或CD8⁺T细胞。

本发明还提供了N-乙酰半胱氨酸体外扩增T细胞的最适剂量为1 mmol/L~10 mmol/L。

本发明采用小分子药物NAC对CD4⁺ T或CD8⁺T中央记忆性细胞进行了有效的体外扩增，并且找出了其促进体外扩增的最适浓度，该方法具有安全性高、成本低廉等优点，为过继免疫治疗的广泛开展提供了良好的技术支持。

附图说明

图1为不同浓度的NAC对CD4⁺ T细胞的扩增效果。

图2为NAC处理后不同时间点的两组CD4⁺ T细胞数量的比较。

图3为不同时间点对CD4⁺ T细胞中CD4⁺ TCM所占比例的检测。

图4为两组数据CD4⁺TCM的数量（15天）。

图5为不同浓度的NAC对CD8⁺ T细胞的扩增效果。

图6为NAC处理后不同时间点的两组CD8⁺ T细胞数量的比较。

具体实施方式

为了更好地理解本发明的实质，下面结合试验和结果来说明NAC对中央记忆性T细胞的绝对数量在体外扩增上的应用。

试验材料

人的外周成分血由广州市血液中心提供，试验中随机选取了24份正常人的血液样本。