[发明专利]一种基于PCR的甜瓜杂交种种子遗传纯度快速鉴定方法

权利要求书

1.甜瓜杂交种‘海蜜2号’种子遗传纯度的鉴定方法，其特征在于：分别利用SRAP引物组合NAUSRem6/NAUSRfc8和/或RAPD引物NAURP401，以‘海蜜2号’甜瓜亲本与F₁单株基因组DNA为模板进行PCR扩增，应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物；只有同时具有亲本特异条带的单株才为真正的杂交种，缺少任一亲本条带均为假杂交种；所述的SRAP引物组合NAUSRem6/NAUSRfc8的正向引物NAUSRem6序列为SEQ ID NO.1，反向引物NAUSRfc8序列为SEQ ID NO.2，该引物组合能够扩增出大小为350bp的母本特异条带，370bp的父本特异条带；所述的RAPD引物NAURP401序列为SEQ ID NO.3，产生大小为1270bp的母本特异条带，960bp的父本特异条带。

2.根据权利要求1所述的甜瓜杂交种‘海蜜2号’种子遗传纯度的鉴定方法，其特征在于提取‘海蜜2号’甜瓜亲本幼苗与F₁单株幼苗基因组DNA为模板进行PCR扩增：（1）SRAP标记PCR反应，反应体系为：20ng基因组DNA，1.2mmol·L^-1Mg²⁺，0.15mmol·L^-1dNTPs，0.5μmol·L^-1正向引物NAUSRem6和0.5μmol·L^-1反向引物NAUSRfc8，0.75U TaqDNA聚合酶，总体系10μL；扩增程序为：94℃3min；94℃1min，35℃1min，72℃1min 30s，5个循环；94℃1min，50℃1min，72℃1min30s，33个循环；72℃延伸7min；（2）RAPD标记PCR反应，反应体系为：20ng基因组DNA，2.5mmol·L^-1MgCl₂,0.15mmol·L^-1dNTPs，0.4μmol·L^-1引物NAURP401，0.75U TaqDNA聚合酶，总体系18μL；扩增程序为：94℃2min；94℃30s，37℃1min，72℃1min 30s，45个循环；72℃延伸10min。

3.根据权利要求1所述的甜瓜杂交种‘海蜜2号’种子遗传纯度的鉴定方法，其特征在于根据所述的PCR扩增产物电泳分析，进行种子遗传纯度鉴定；只有同时具有父、母本特异标记条带的幼苗单株才鉴定为真杂交种，缺少任一亲本条带均判定为假杂交种；根据鉴定结果计算供检种子的遗传纯度：[供检种子粒数-假杂交种粒数]/供检种子粒数×100，单位为%。