[发明专利]用于生产己二酸的重组质粒、基因工程菌、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒携带有蓝藻鱼腥藻（Cyanobacterium anabaena）7120碳酸酐酶的基因和大肠杆菌（Escherichia coli）K12-MG1655乙酰辅酶A转移酶paaJ的基因。

2.如权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为PET-CAPA。

3.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通过将如权利要求1或2所述的重组质粒转入敲除丙酮酸甲醇裂解酶基因的大肠杆菌BL21(DE3)P中获得。

4.如权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为BLPCAPA。

5.如权利要求1所述的重组质粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：设计引物并以大肠杆菌为模板克隆获得两端带有不同限制性酶切位点的包含所述大肠杆菌乙酰辅酶A转移酶paaJ的基因序列的DNA片段，将所述DNA片段和携带有所述蓝藻鱼腥藻7120碳酸酐酶的基因的质粒经所述限制性内切酶酶切并连接，其中优选地，所述引物为：PAF：CGCGGATCCCGTGAAGCCTTTATTTGTGACGG，划线处为BamHⅠ酶切位点，PAR：AGGGTCGACTCAAACACGCTCCAGAATCATGG划线处为SalⅠ酶切位点；所述限制性内切酶为BamHⅠ和SalⅠ。

6.如权利要求3或4所述的基因工程菌株的制备方法，其特征在于，所述方法包括将如权利要求1或2中任一项所述的重组质粒转入所述敲除丙酮酸甲醇裂解酶基因的大肠杆菌BL21(DE3)P中。

7.如权利要求1或2所述的重组质粒在制备用于基因工程菌发酵生产己二酸的生物产品中的用途。

8.如权利要求3或4所述的基因工程菌在制备用于基因工程菌发酵生产己二酸的生物产品中的用途。

9.使用如权利要求3或4所述的基因工程菌发酵多种碳源生产己二酸的方法，其特征在于，所述方法包括在生长过程中生物量的积累及加入不同的诱导剂时，在完全厌氧或先有氧积累菌体量，再无氧进行酸发酵的双阶段培养而生产己二酸。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述碳源为葡萄糖和/或所述诱导剂为乳糖或IPTG。