[发明专利]一种ɑ-1，3半乳糖基转移酶融合蛋白及制备方法有效
| 申请号： | 201210195131.0 | 申请日： | 2012-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN102703399A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 蔡传奇;郭海军;闫宇鹏;云升;王云虹 | 申请（专利权）人： | 北京京蒙高科干细胞技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N1/21;C12N15/62;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 冯琼;李玉秋 |
| 地址： | 100085 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 半乳糖 转移酶 融合 蛋白 制备 方法 | ||
1.一种融合蛋白，其特征在于，由TRX蛋白与ɑ-1，3半乳糖基转移酶融合形成，具有催化ɑ-半乳糖表位形成活性。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述ɑ-1，3半乳糖基转移酶包括其催化结构功能域α1,3GTcd部分。
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述ɑ-1，3半乳糖基转移酶还包括用于纯化的序列。
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述用于纯化的序列为GST或His-tag结构域。
5.根据权利要求1-4任一项所述的融合蛋白，其特征在于：其为可溶状态。
6.根据权利要求1-4任一项所述的融合蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
7.产生根据权利要求1-6任一项所述融合蛋白的细菌。
8.根据权利要求7所述的细菌，其特征在于，其为大肠杆菌DH5α或大肠杆菌BL21（DE3）。
9.一种生产权利要求1至6任一项所述融合蛋白的方法。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：制备包含ɑ-1，3半乳糖基转移酶基因与TRX基因的重组DNA，将所述重组DNA分子转化受体细胞，培养获得ɑ-1，3半乳糖基转移酶的融合蛋白。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述重组DNA包括用于纯化的DNA序列部分。
12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：具体步骤为：
步骤1、以如SEQ ID No.1所示序列为模板进行PCR扩增，其上游引物序列如SEQ ID No.4所示；下游引物序列如SEQ ID No.5所示;
步骤2：将PCR产物与pET-32a质粒载体用KpnI及XhoI两种限制性内切酶的作用下酶切；
步骤3：在T4DNA连接酶的作用下，连接载体与基因；将连接产物转化感受态细菌，培养获得ɑ-1，3半乳糖基转移酶的融合蛋白。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于：所述细菌为大肠 杆菌DH5α或大肠杆菌BL21（DE3）。
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