[发明专利]一种西仑吉肽的固相合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种固相环化技术合成环肽的方法，尤其是设计西仑吉肽的合成路线。

背景技术

西仑吉肽(Cilengitide)，中文别称：环(L-精氨酰甘氨酰-L-天冬氨酰-D-苯丙氨酰-N-甲基-L-缬氨酰)，是一种人工合成的一个新类别抗癌药物。默克尔公司研究发现西仑吉肽联合化放疗(合并及辅助替莫唑胺加放疗)可能延长生存期，同时作为第一个整合素抑制因子抗肿瘤药物，已进入III期临床试验，其重要机理是通过阻碍血管生长来靶向作用于肿瘤及为肿瘤提供营养、促进癌症细胞生长的供血结构。

西仑吉肽分子式为：C₂₇H₄₀N₈O₇，具有以下结构：

目前环肽的制备方法主要有液相合成工艺、固相合成前体肽在液相中环化工艺、固相合成工艺，其中前两种合成工艺都是合成的前体肽在液相中环化，这种方法需要反应物在极稀的溶剂中进行反应(10^-3～10^-4mol/L)，而且分子间易发生反应生成线型或环状聚合物，极大地降低了环化收率，给后续的纯化带来了麻烦，而且在规模化生产中产生大量废液，不利于工业化生产。结合西仑吉肽的结构，利用固相假稀效益原理，开发了一种高效环化技术，环化时间缩短为液相环化的20％～30％，反应使用溶剂为液相的2％-8％。

发明内容

本发明涉及一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污染小、可以大规模工业化生产的固相环化技术的合成工艺。

本方案主要包括以下步骤：

1.由替代度为0.4～0.9mmol/g的Wang Resin和Fmoc-L-Asp-OtBu反应制备Fmoc-L-Asp(OtBu)-Wang Resin。

2.通过固相逐步合成法依次偶联剩余4个含有Fmoc的氨基酸，得到西仑吉肽前体肽A-Wang Resin。

3.在西仑吉肽前体肽A-Wang Resin中，分别加入脱Fmoc和OtBu的试剂，得到西仑吉肽前体肽B-Wang Resin。

4.在DMF或DCM中加入西仑吉肽前体肽B-Wang Resin、环化试剂，经过反应得西仑吉肽-Wang Resin。

5.裂解，纯化，冷冻干燥得到纯西仑吉肽。

上述西仑吉肽的固相环化合成工艺，其中

步骤1)所述的Fmoc-L-Asp(OtBu)-Wang Resin，是Fmoc-L-Asp-OtBu与Wang Resin在DCM或DMF中，在DIC+HOBT+DMAP作用下生成的。

步骤2)中使用溶剂为DMF或DCM，偶联试剂为C+D+E，其中C为HOAt或HOBt，D为HBTU或HATU或TBTU，E为DIEA；所述的Fmoc保护的氨基酸分别为：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-Arg(Mtr)-OH、Fmoc-N-Me-L-Val、Fmoc-D-Phe-OH；Fmoc保护基的脱保护剂为体积比25％的哌啶-DMF溶液。

步骤3)加入的脱保护基试剂分别为：体积比25％的哌啶-DMF溶液和PhOH-DCM溶液脱OtBu反应时间为5～8h。

步骤4)环化试剂为DPPA+DIEA或DPPA+NMM或DIC+HOBT或C+D+E，其中C为HOAr或HOBt，D为HBTU或HATU或TBTU，E为DIEA。

步骤5)裂解试剂为：TFA/H₂O/TlS。

与已有的传统的液相环化技术相比，本发明工艺具有操作简单、收率高、后处理简单、反应时间短、产生废液少、成本低等优点，在环肽药物设计合成工艺领域有广泛的应用价值。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面给出的实例以便对本发明进行具体描述，有必要在此指出，本发明不受本方法作为唯一的限制，在本领域对本发明做出一些非本质改动和调整，都属于本发明的保护范围。

在本权利要求书和说明书中出现的缩写代表的意义为下表：