[发明专利]一种植物中硫代葡萄糖苷总量的测定方法

权利要求书

1.一种植物中硫代葡萄糖苷总量的测定方法，其特征在于：以植物为试材，原料经粉碎后，用乙酸盐缓冲液匀浆，匀浆液高温水浴灭酶后，依次添加聚乙烯吡咯烷酮、醋酸铅/醋酸钡混合液及饱和硫酸钠溶液，经振荡混匀后离心制得硫苷提取液。硫苷提取液经碱降解、37％浓盐酸中和，中和液再与铁氰化钾溶液反应后，用分光光度计在420nm处测定铁氰化钾吸光值的减少量。以烯丙基硫苷(Sinigrin)为标准品制作标准曲线，经计算得到植物中总硫苷含量。

2.根据权利要求1，一种植物中硫代葡萄糖苷总量的测定方法包括以下步骤：

(1)硫苷的提取：

取适量植物样品，粉碎后，按料液比(g/ml)1∶100～1∶200加入乙酸盐缓冲液(0.2mol/L，pH 4.2)，充分研磨匀浆，匀浆液于70～100℃水浴15min灭酶，冷却后依次按每1g样品加入6g聚乙烯吡咯烷酮和60～100ml醋酸铅/醋酸钡混合液，室温静置15min后，按每1g样品加入60～100ml饱和硫酸钠溶液，振荡混匀，于10000g离心15min，收集上清液即为硫苷提取液。

(2)硫苷的碱降解：

取上述硫苷提取液2～4ml与等体积2mol/L NaOH或KOH溶液混合，室温反应30min后用37％浓盐酸中和反应液。

(3)硫苷的测定：

取上述中和后的反应液2～4ml与等体积的2mmol/L溶于磷酸盐缓冲液(0.2mol/L，pH 7.0)的铁氰化钾溶液混合，室温静置15min后于15s内测定420nm处吸光值。以烯丙基硫苷(Sinigrin)做硫苷标准曲线，横坐标为烯丙基硫苷浓度，纵坐标为420nm处吸光值减少量ΔA₄₂₀(A_420max-A₄₂₀)，经计算测得样品中总硫苷含量。A_420max为加入不含硫苷的提取液时铁氰化钾溶液吸光值，实验空白对照为硫苷提取液与磷酸盐缓冲液的混合液。

(4)硫苷总量计算：

根据测得的ΔA₄₂₀代入标准曲线方程，按下式计算样品中总硫苷含量：

Y=A·VM]]>

Y：样品中硫苷总量(μmol/g)；

A：由标准曲线计算所得硫苷浓度(μmol/ml)；

V：整个硫苷提取液体积(ml)；

M：所取样品质量(g)。

3.如权利要求1，2所述一种植物中硫代葡萄糖苷总量的测定方法，其特征在于：植物可以是甘蓝、西兰花、结球甘蓝、羽衣甘蓝、花椰菜、芥菜、球茎甘蓝、抱子甘蓝、萝卜、芜菁和辣根等植物的种子，也可以是这些植物的芽苗及植株等营养体。