[发明专利]一种提取和分离虫草素的方法

说明书

技术领域

本发明属于农产品深加工技术领域，具体涉及一种提取和分离虫草素的方法。

背景技术

虫草菌素又称虫草素、蛹虫草菌素，3’-脱氧腺苷，它是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素。其分子式为C₁₀H₁₃N₅O₃，分子量为25l.24，熔点230-23l℃，溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿，紫外光的最大吸收波长为259nm。虫草素有抗肿瘤、抗白血病、抗菌、免疫调节、清除体内自由基等多方面的药理作用。另据报道，虫草素一方面具有对DNA和RNA合成过程、加RNA和mRNA转录后修饰过程及腺苷酸环化酶活化等三方面的抑制作用，另一方面它又能促进细胞分化，重建细胞骨架。虫草素有降低胆固醇、降血糖、抗感染、抗疟原虫、抗蚊虫的作用，含虫草素的虫草发酵液对哮喘及支气管疾病、肾衰竭病人的肾功能等方面都有良好的辅助治疗效果。

目前，虫草素主要通过生物合成的方法经由两条途径获得：一是直接从蛹虫草子实体中提取；二是通过蛹虫草液体发酵，从发酵液中提取。虫草素的获得主要从蛹虫草子实体中提取。但子实体中含量只有0.2-0.6%，提取效率不高，因此虫草素生产成本极高，价格昂贵。因为虫草素疗效显著并且大量提取分离得到纯品非常不易，目前国际市场上虫草素的价格非常昂贵，随着研究的深入虫草素的商业价值更是不可估量。

中山大学采用行星球磨法对冬虫夏草子实体进行破碎，超声溶解，活性炭除杂来提取虫草素（专利申请号CN201110004151.0）。但是该方法在子实体破碎过程中容易产生热量造成虫草素提取率低，而且只能对干燥样品进行加工，对于含水高的样品加工困难。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的虫草素提取方法过程中容易产生热量造成虫草素提取率低、纯度低、只能对干燥样品进行加工，对于含水高的样品加工困难的问题，而提供一种提取和分离虫草素的方法。

一种提取和分离虫草素的方法，该方法包括如下步骤：

（1）超低温粉碎：将雪花冬虫夏草原料采用低温粉碎机以液氮为介质在温度为-196℃以下粉碎，得到粉末；

（2）虫草素的提取：将步骤（1）得到的粉末和蒸馏水以重量比1:5-1:20混合，超声波提取、离心过滤后，得到提取液；

（3）分离：将步骤（2）得到的提取液与大孔树脂混合平衡，温度20℃，经洗脱液洗脱树脂柱，收集流出液冻干；

（4）纯化：用反向高效液相色谱将步骤（3）得到的流出液进行纯化，得到虫草素的浓缩物。

优选的是，所述的步骤（1）中雪花冬虫夏草为雪花冬虫夏草子实体或雪花冬虫夏草菌丝体。

优选的是，所述的步骤（1）的温度为-196℃。

优选的是，所述的步骤（2）是在超生频率20-30KHz，输出功率100W-200W条件下进行超生波提取。

优选的是，所述的步骤（2）中的超声波提取时间为15-30min。

优选的是，所述的步骤（3）中的提取液的上样量为大孔树脂体积的10倍，提取液的吸附流速为大孔树脂吸附流速的1-3倍。

优选的是，所述的步骤（3）中的洗脱液为浓度为20-50%（V/V）的乙醇，洗脱液为5-10倍树脂柱体积，流速2-4BV/hr。

优选的是，所述的步骤（4）中反向高效液相色谱条件为：

色谱柱：20×150mm×5um的C18制备柱，

柱温：20℃，

流动相组成：10%甲醇，0.05M磷酸缓冲液，pH7.2，

流速：1ml/min，

检测波长：260nm，

进样量：200ul。

优选的是，所述的步骤（4）用反向高效液相色谱将步骤（3）得到的流出液进行纯化，经纳滤脱盐、干燥得到虫草素的浓缩物。

优选的是，所述的纳滤脱盐用的复合膜为截留分子量200Da的NF-1812卷式聚酰胺。

本发明的有益效果