[发明专利]霍乱弧菌(VC)的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

权利要求书

1.一种霍乱弧菌(VC)的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，包含有一条序列表中序列1所示的霍乱弧菌(VC)的靶标核酸(VC RNA)的捕获探针，一对用于在M-MLV反转录酶作用下产生VC靶标核酸(VC RNA)的DNA拷贝的VC检测引物T7和nT7，和一条用于与在T7 RNA聚合酶作用下根据所述VC靶标核酸(VC RNA)的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的VC检测探针。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于：所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述VC检测引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物序列如序列表中序列3所示，nT7引物序列如序列表中序列4所示；所述VC检测探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含有M-MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶，所述M-MLV反转录酶和T7RNA聚合酶存在于一SAT酶液中，所述捕获探针存在于一核酸提取液中，所述T7引物、nT7引物和VC检测探针存在于一VC检测液中。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含有VC内标和内标检测探针；所述VC内标为VC核苷酸序列(VC RNA)的竞争性内标，可与捕获探针特异性结合，并使用同一对引物(T7和nT7引物)，由序列表中序列7所示的VC IC RNA；所述内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团，且所述内标检测探针存在于VC检测液中。

5.根据权利要求1至4任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含裂解液、核酸提取液、洗涤液、VC反应液、VC检测液、SAT酶液、VC阳性对照、VC阴性对照和VC内标，其中：

裂解液：含硫酸铵((NH₄)₂SO₄)和HEPES；

核酸提取液：含捕获探针和磁珠；

洗涤液：含NaCl和SDS；

VC反应液：含dNTP和NTP；

VC检测液：含T7引物、nT7引物、VC检测探针和内标检测探针；

SAT酶液：含M-MLV反转录酶、T7 RNA聚合酶；

VC阳性对照；含霍乱弧菌(VC)toxR的体外转录RNA稀释物；

VC阴性对照：不含有霍乱弧菌(VC)靶标核酸(VC RNA)序列或不含有霍乱弧菌的溶液，如生理盐水；

VC内标：VC IC RNA(序列如序列表中序列7所示)。