[发明专利]一种金线莲指纹图谱的建立方法及福建金线莲和台湾金线莲指纹图谱

权利要求书

1.一种金线莲指纹图谱的建立方法，其特征在于采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：精密称取供试品细粉溶于甲醇中，进行超声处理后，离心取上清液，将该上清液过滤，即得供试品溶液；

（2）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；洗脱方式：以磷酸和甲醇组成的梯度洗脱液为流动相，进行梯度洗脱；紫外检测：检测波长为310～320nm；

（3）测定：精密吸取供试品溶液，将其注入高效液相色谱仪，依照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

2.如权利要求1所述的一种金线莲指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（1）为：精密称取供试品细粉0.1～5g置于具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇10～100mL，密塞，精密称定，超声处理35～55分钟后，放冷至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心7～15分钟后取上清液，将该上清液经滤膜过滤，即得供试品溶液。

3.如权利要求2所述的一种金线莲指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（1）为：精密称取供试品细粉0.2g置于具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密称定，超声处理45分钟后，放冷至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心10分钟后取上清液，将该上清液经0.25μm滤膜过滤，即得供试品溶液。

4.如权利要求1所述的一种金线莲指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（2）为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；洗脱方式：以0.1～0.6%磷酸和甲醇组成的梯度洗脱液为流动相，进行梯度洗脱；柱温：25～30℃；紫外检测：检测波长为313～318nm；流速：0.8～1.2mL/min。

5.如权利要求4所述的一种金线莲指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（2）为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；洗脱方式：以0.4%磷酸和甲醇组成的梯度洗脱液为流动相，进行梯度洗脱；柱温：30℃；紫外检测：检测波长为316nm；流速：1.0mL/min。

6.如权利要求5所述的一种金线莲指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（2）中的梯度洗脱的程序按以下体积浓度配置进行：

0分钟时，流动相为25%的甲醇和75%的0.4%磷酸溶液；

30分钟时，流动相为50%的甲醇和50%的0.4%磷酸溶液；

45分钟时，流动相为75%的甲醇和25%的0.4%磷酸溶液；

55分钟时，流动相为75%的甲醇和25%的0.4%磷酸溶液；

60分钟时，流动相为25%的甲醇和75%的0.4%磷酸溶液；

65分钟时，流动相为25%的甲醇和75%的0.4%磷酸溶液。

7.如权利要求1所述的一种金线莲指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（3）为：精密吸取供试品溶液5μL，将其注入高效液相色谱仪，依照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

8.一种如权利要求1所述指纹图谱的建立方法所得的福建金线莲的指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱长度为65分钟，共有10个特征峰，其中5号特征峰为阿魏酸内参照峰，以5号特征峰分别计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积得所述指纹图谱，具体如下：

1号峰，相对保留时间0.16，相对峰面积0.27～2.08；

2号峰，相对保留时间0.59～0.60，相对峰面积0.44～0.69；

3号峰，相对保留时间0.91～0.92，相对峰面积0.60～2.21；

4号峰，相对保留时间0.96，相对峰面积0.27～0.88；

5号峰，相对保留时间1.00，相对峰面积1.00；

6号峰，相对保留时间1.12，相对峰面积0.52～10.18；

7号峰，相对保留时间1.20，相对峰面积0.74～2.22；

8号峰，相对保留时间1.35，相对峰面积0.36～2.13；

9号峰，相对保留时间1.74，相对峰面积2.56～5.53；

10号峰，相对保留时间2.13～2.14，相对峰面积0.47～1.00；

上述特征峰的保留时间重现性RSD小于2%，峰面积重现性RSD小于3%。

9.一种如权利要求1所述指纹图谱的建立方法所得的台湾金线莲的指纹图谱，其特征在于：所述指纹图谱长度为65分钟，共有11个特征峰，其中4’号特征峰为阿魏酸内参照峰，以4’号特征峰分别计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积得所述指纹图谱，具体如下：

1’号峰，相对保留时间0.16，相对峰面积0.48～1.34；

2’号峰，相对保留时间0.91～0.92，相对峰面积1.25～2.86；

3’号峰，相对保留时间0.96，相对峰面积0.24～0.33；

4’号峰，相对保留时间1.00，相对峰面积1.00；

5’号峰，相对保留时间1.12，相对峰面积0.61～1.94；

6’号峰，相对保留时间1.20，相对峰面积0.65～2.58；

7’号峰，相对保留时间1.35～1.36，相对峰面积0.19～0.39；

8’号峰，相对保留时间1.70～1.72，相对峰面积0.14～0.40；

9’号峰，相对保留时间2.48～2.49，相对峰面积0.61～1.15；

10’号峰，相对保留时间2.53～2.54，相对峰面积1.27～4.64；

11’号峰，相对保留时间2.55～2.57，相对峰面积0.25～0.62；

上述特征峰的保留时间重现性RSD小于2%，峰面积重现性RSD小于3%。