[发明专利]一种金线莲指纹图谱的建立方法及福建金线莲和台湾金线莲指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于中药质量控制领域，特别是涉及一种金线莲指纹图谱的建立方法及福建金线莲和台湾金线莲指纹图谱。

背景技术

金线莲为兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roburghii(Wall.)Lindl)、台湾金线莲Anoectochilus formosanus Hay，多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，在港台及东南亚地区素有“药王”、“金草”、“神药”和“鸟人参”等美称。性平、味甘，归肺、肝、肾、膀胱经。具有清热凉血、解毒消肿、祛风利湿、镇惊平肝、补肾、利尿、润肺止咳等功效。用于治疗小儿急惊风高热、风湿性关节炎、肝炎、肾炎、膀胱炎、乳糜尿、血尿、支气管炎、咯血、糖尿病、高血压等；现代用于抗肿瘤等疑难杂症，提高免疫力、保肝护肝、降血脂、辅助抗动脉硬化及脑血栓、抗病毒、治重症肌无力、祛除青春痘和雀斑等。

金线莲主要分布于亚洲的日本、中国、斯里兰卡、印度和尼泊尔等国，我国南方福建、广西、广东、海南、贵州、四川、云南等省都有其丰富的药材资源，福建与台湾两省作为药用的主要有：福建金线莲、台湾金线莲和高雄金线莲三种。

金线莲性状特征：福建金线莲本品为干燥全草，略呈皱缩状，茎节明显；叶互生具柄，叶基膜质鞘状抱茎，叶黄绿色，呈卵形或椭圆形，叶面有光泽、叶脉为金黄色羽状网脉，叶背淡紫红色；香气特异。

台湾金线莲与福建金线莲主要不同点为叶墨绿色，叶脉为白色羽状网脉。

金线莲的化学成分与含量确切，具有重要药理活性的物质主要为：黄酮类化合物（槲皮素、异鼠李素)，甾体类化合物（24～异丙烯基胆甾醇、开唇兰甾醇、麦角甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、β～谷甾醇等），三萜类化合物（木栓酮、琥珀酸、香豆酸、阿魏酸、胡萝卜苷、棕榈酸、齐墩果酸、熊果酸），多糖类（多糖13.326%，低聚糖11.243%，还原糖9.73%），生物碱（石杉碱甲和乌头碱），和强心甙类，酯类，牛磺酸等。

在金线莲药材的质量评价方面，目前国内外发表的文献中，一般采用显微鉴定、薄层色谱鉴定，或单一成分含量测定，如黄酮类、金线莲苷等，并作为金线莲药材的质量评价指标，显然，这种质量评价方法不能准确鉴别和评价金线莲药材质量。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种鉴别金线莲真伪优劣的指纹图谱的建立方法。

本发明的另一目的，是提供福建金线莲的指纹图谱。

本发明的再一目的，是提供台湾金线莲的指纹图谱。

本发明的技术方案如下：

一种金线莲指纹图谱的建立方法，采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：精密称取供试品细粉溶于甲醇中，进行超声处理后，离心取上清液，将该上清液过滤，即得供试品溶液；

（2）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；洗脱方式：以磷酸和甲醇组成的梯度洗脱液为流动相，进行梯度洗脱；紫外检测：检测波长为310～320nm。

（3）测定：精密吸取供试品溶液，将其注入高效液相色谱仪，依照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤（1）为：精密称取供试品细粉0.1～5g置于具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇10～100mL，密塞，精密称定，超声处理35～55分钟后，放冷至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心7～15分钟后取上清液，将该上清液经滤膜过滤，即得供试品溶液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤（1）为：精密称取供试品细粉0.2g置于具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密称定，超声处理45分钟后，放冷至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心10分钟后取上清液，将该上清液经0.25μm滤膜过滤，即得供试品溶液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤（2）为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；洗脱方式：以0.1～0.6%磷酸和甲醇组成的梯度洗脱液为流动相，进行梯度洗脱；柱温：25～30℃；紫外检测：检测波长为313～318nm；流速：0.8～1.2mL/min。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤（2）为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；洗脱方式：以0.4%磷酸和甲醇组成的梯度洗脱液为流动相，进行梯度洗脱；柱温：30℃；紫外检测：检测波长为316nm；流速：1.0mL/min。

在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤（2）中的梯度洗脱的程序按以下体积浓度配置进行：

0分钟时，流动相为25%的甲醇和75%的0.4%磷酸溶液；