[发明专利]一种中国汉族人结核病基因检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种中国汉族人结核病基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：探针、DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品、SAP反应液、以及iPlex反应液。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述探针由通常的核苷酸引物合成仪合成，序列如下：

扩增MYBBP1A基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGTTCGTGTTTCGGTGAGTGTG

下游引物：ACGTTGGATGACTCTGCGTCGCTTCTCCA

延伸引物：CGTCGCTTCTCCAGGCGACATCGGCT

扩增RELA基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGAGCTGAATCAGGGCCTGTTG

下游引物：ACGTTGGATGTCAGTTTCCTCTCTGGAGGG

延伸引物：GGCCTGTTGTACTTTCTTAAGGAAAA。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述DNA抽提试剂包括缓冲液A：0.5mmol/L的SDS，缓冲液B：50mmol/L的NaOH，缓冲液D：1mmol/L的碳酸钠-丙酮，缓冲液W：无水乙醇，洗脱液：10mmol/L的Tris盐。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述预混PCR反应液含有中国汉族人结核病相关的MYBBP1A和RELA基因突变位点的扩增引物，引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列分别如下：

扩增MYBBP1A基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGTTCGTGTTTCGGTGAGTGTG

下游引物：ACGTTGGATGACTCTGCGTCGCTTCTCCA

延伸引物：CGTCGCTTCTCCAGGCGACATCGGCT

扩增RELA基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGAGCTGAATCAGGGCCTGTTG

下游引物：ACGTTGGATGTCAGTTTCCTCTCTGGAGGG

延伸引物：GGCCTGTTGTACTTTCTTAAGGAAAA。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标准阳性对照品是含有MYBBP1A和RELA的两个基因中含有突变核苷酸片段构成的Pgem-T重组质粒，包含有四种，序列分别如下：

Seq1：

gCacacGtgtTTCGTGTTTCGGTGAGTGTGgcggagatggagagccgggatcccgccgagccgatgtcgccTGGAGAAGCGACGCAGAGTggcgCccgGc

Seq2：

gCacacGtgtTTCGTGTTTCGGTGAGTGTGgcggagatggagagccgggatcccgcccagccgatgtcgccTG GAGAAGCGACGCAGAGTggcgCccgGc

Seq3：

tCcagaGggaAGCTGAATCAGGGCCTGTTGtactttcttaaggaaaactgagggagggcacgccccacctCCCTCCAGAGAGGAAACTGAatcagAtgcg

Seq4：

tCcagaGggaAGCTGAATCAGGGCCTGTTGtactttcttaaggaaaattgagggagggcacgccccacctCCCTCCAGAGAGGAAACTGAatcagAtgcg。

6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标准阴性对照品包含的序列为含有拟南芥基因片断100个核苷酸构成的Pgem-T重组质粒，序列如下：

Seq5：

ATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTG。