[发明专利]一种中国汉族人结核病基因检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物科学领域，更具体地说，涉及一种中国汉族人结核病基因检测试剂盒及检测方法。

背景技术

结核病是由结核杆菌侵入人体引起的一种具有较强的传染性慢消耗性疾病。每个器官和系统都可患病，其中以肺结核最为常见。结核病是全球各类传染病的首位杀手，全球有1/3的人(约20亿)感染了结核病。现有结核病人约2000万。每年新增病人约900万，每年死亡人数达到300万。近年来，由于多发耐药结核、结核菌与艾滋病病毒的双重感染和流动人口增多，结核病疫情出现回升，严重危害着广大人们群众的身体健康，已成为重大的公共卫生问题和社会问题。我国是世界上22个结核病高负担国家之一，据统计我国结核病的发病率为121/10万，结核病患者数量居世界第二位，严重制约我国经济和社会的发展。

肺结核病的临床表现是低热、盗汗、疲劳、食欲不振、体重减轻。肺结核局部症状有咳嗽、胸闷、气短、咯血等。病情轻者，诸症未必全部出现，重者则各种症状大多俱现，或先后相继发生，或合并出现。发病多慢，常逐渐加重，但亦有偶有急骤发病，很快恶化者。有些病人在潜伏期、甚至进展期无任何症状，偶尔体检时才发现。

越来越多的证据表明，除病菌和环境等因素以外，遗传学基因因素在结核病，包括复发和耐药性结核病的发生与发展过程中扮演着重要的角色。通过以家族研究为基础的相关分析，表明个体对结核病易感性或抗性的差异与宿主的基因相关。在动物实验研究的基础上，已筛选出了多种人的结核病相关候选基因，并在不同人种间得到了研究的验证。

结核病是一种顽固的慢性疾病，一旦感染发病，若不及时规范地彻底治疗，可以慢性带菌、复发、恶化、耐药，难以治愈，形成慢性传染源。因此，结核病如能及时发现，采用适当的治疗手段，往往能取得满意疗效。人们希望有一种简单而客观的方法可以进行肺结核病基因检测，做到早发现、早诊断，提早采取预防措施，尽量避免病患的发生。

发明内容

针对上述现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种中国汉族人结核病基因检测试剂盒及检测方法，可以在可能发病之前快捷地进行成人肺结核病易感基因的检测，通过对成人肺结核病基因检测，做到早发现，早诊断，提前采取预防措施，尽量避免病患的发生。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种中国汉族人结核病基因检测试剂盒，包括：探针、DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品、SAP反应液、iPlex反应液。

所述探针由通常的核苷酸引物合成仪合成，序列如下：

扩增MYBBP1A基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGTTCGTGTTTCGGTGAGTGTG

下游引物：ACGTTGGATGACTCTGCGTCGCTTCTCCA

延伸引物：CGTCGCTTCTCCAGGCGACATCGGCT

扩增RELA基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGAGCTGAATCAGGGCCTGTTG

下游引物：ACGTTGGATGTCAGTTTCCTCTCTGGAGGG

延伸引物：GGCCTGTTGTACTTTCTTAAGGAAAA。

所述DNA抽提试剂包括缓冲液A：0.5mmol/L的SDS，缓冲液B：50mmol/L的Na0H，缓冲液D：1mmol/L的碳酸钠-丙酮，缓冲液W：无水乙醇，洗脱液：10mmol/L的Tris盐。

所述预混PCR反应液含有中国汉族人结核病相关的MYBBP1A和RELA基因突变位点的扩增引物，引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列分别如下：

扩增MYBBP1A基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGTTCGTGTTTCGGTGAGTGTG

下游引物：ACGTTGGATGACTCTGCGTCGCTTCTCCA

延伸引物：CGTCGCTTCTCCAGGCGACATCGGCT

扩增RELA基因的引物序列如下：

上游引物：ACGTTGGATGAGCTGAATCAGGGCCTGTTG

下游引物：ACGTTGGATGTCAGTTTCCTCTCTGGAGGG

延伸引物：GGCCTGTTGTACTTTCTTAAGGAAAA。

所述标准阳性对照品是含有MYBBP1A和RELA的两个基因中含有突变核苷酸片段构成的Pgem-T重组质粒，包含有四种，序列分别如下：

Seq1：