[发明专利]β-兴奋剂类半抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及β-兴奋剂类半抗原及其制备方法和应用。

技术背景

β-兴奋剂（β-agonist）全称β-肾上腺素受体激动剂（β-adrenoceptor agonist），又叫β-激动剂，是一类化学结构和生理功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙胺类药物。常见的β-兴奋剂为克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、马布特罗、非诺特罗、特布他林等。β-兴奋剂能选择性地与细胞膜上的β-肾上腺素受体结合，起到调节交感神经兴奋、松弛气管平滑肌的功能，因此在临床上常用于人和动物哮喘类病症的治疗。20世纪80年代有研究表明，β-兴奋剂影响营养物质在动物体内的流向和重新分配，使体内的脂肪分解代谢增强、蛋白质合成增加，显著提高瘦肉率。β-兴奋剂残留会聚集在动物可食用组织中，由于这类化合物具有口服活性，如果违法超量使用将会对人与动物的肝、肾等内脏器官产生毒副作用。因此世界各国已将这类物质列为禁止用于食品动物的化学物质。

目前国内外关于β-兴奋剂类药物残留的主要检测方法有色谱法，如气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、气质联用法（GC-MS）、液质联用法（LC-MS）；免疫分析法，如酶联免疫法、胶体金免疫法、时间分辨免疫荧光测定等。色谱方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国畜禽养殖户、屠宰场、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种β-兴奋剂类半抗原及其制备方法。

本发明提供的β-兴奋剂类半抗原，分子结构式为：

。

本发明提供的β-兴奋剂类半抗原的制备方法，包括如下步骤：

1.0g沙丁胺醇，溶入20ml N,N-二甲基甲酰胺中，然后加入10%摩尔当量的四甲基哌啶氧化物、10%摩尔当量的四丁基氯化铵和20ml 0.5mol/L的NaHCO₃水溶液，室温下搅拌30min后，加入1.1摩尔当量的N-氯代琥珀酰亚胺，室温反应2~5h后，除去大部分溶剂，乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥，除去溶剂后柱层析纯化，得到白色固体沙丁胺醇单氧化物，即为β-兴奋剂类半抗原。

本发明的另一个目的是上述β-兴奋剂类半抗原在免疫检测中的应用，具体包括由所述β-兴奋剂类半抗原与载体蛋白偶联得到的β-兴奋剂类抗原，及由所得β-兴奋剂类抗原免疫动物制备得到的β-兴奋剂类抗体。

其中所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。

所述抗体为β-兴奋剂类单克隆抗体。

本发明还提供由上述β-兴奋剂类抗体制备的酶联免疫试剂盒，及其在检测组织、肝脏、尿液、血清、饲料、牛奶、奶粉样品中β-兴奋剂类残留的应用。

本发明提供的β-兴奋剂类半抗原既最大程度地保留了β-兴奋剂类母核的化学结构，又通过化学合成改造引入了可以与蛋白质偶联的—CHO，合成方法简单，纯度、产率较高；用该半抗原作为原料，制备适于动物免疫的抗原体系免疫动物，所得抗体的效价、特异性、亲和力都比较好；所得的抗体用于酶联免疫试剂盒，可以同时检测克仑特罗、沙丁胺醇、塞布特罗、妥布特罗、溴布特罗、溴氯布特罗六种药物，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适于组织、肝脏、尿液、血清、饲料、牛奶、奶粉样品中β-兴奋剂类残留的现场监控和大量样本的筛查。本发明的β-兴奋剂类半抗原在β-兴奋剂类药物的残留检测中发挥重要作用。

附图说明

图1：β-兴奋剂类半抗原合成路线图

图2：β-兴奋剂类半抗原核磁共振氢谱图

图3：β-兴奋剂类酶联免疫试剂盒标准曲线

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。

实施例1  β-兴奋剂类半抗原的合成和鉴定

一、β-兴奋剂类半抗原的合成（合成路线如图1）