[发明专利]一种木糖醇基因工程菌及其混合转化生产木糖醇的方法

权利要求书

1.一种木糖醇基因工程菌大肠杆菌BL-xdh06  Escherichia coli BL-xdh06，保藏编号为CCTCC NO. M 2012207。

2.利用权利要求1所述的木糖醇基因工程菌和氧化葡糖杆菌混合静止转化D-阿拉伯糖醇生产木糖醇的方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）挑取氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)斜面菌落于种子液培养基，28-37℃、100-260 rpm振荡培养8-20h；

（2）将种子液以体积比1-10 %的接种量接种到扩大培养基，28-37℃、100-260 rpm振荡培养48-96h；

（3）将（2）中的发酵液6000-12000 rpm，4℃离心5-20 min，收集菌泥，用0.1 mol/L pH 6.8的磷酸钾缓冲液洗涤，离心后用适量的细胞转化液重悬菌体； 

（4）将基因工程菌E.coli BL21-xdh06接种于LB-氨苄青霉素培养基中，37 ℃振荡培养过夜，次日以1-10 %的接种量将种子液转接至新鲜LB-Amp培养基中，37 ℃培养至菌体光密度值约为0.6-0.8时，加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷至终浓度0.5-1.2mmol/L进行诱导表达5-15h；

取一定体积工程菌液6000-12000 rpm，4℃离心5-20 min，收集菌泥，用0.1 mol/L pH 6.8的磷酸钾缓冲液洗涤，菌体待用；

（5）将（3）和（4）离心得到得菌体用适量的细胞转化液重悬菌体；

（6）转化液转化温度为28-37 ℃，100-260rpm振荡转化24-60h， 4h取样，转化液中得到木糖醇。

3.利用氧化葡糖杆菌静止转化D-阿拉伯糖醇生产木糖醇的方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）挑取氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)斜面菌落于种子液培养基，28-37℃、100-260 rpm振荡培养8-20h；

（2）将种子液以体积比1-10 %的接种量接种到扩大培养基，28-37℃、100-260 rpm振荡培养48-96h；

（3）将（2）中的发酵液6000-12000 rpm，4℃离心5-20 min，收集菌泥，用0.1 mol/L pH 6.8的磷酸钾缓冲液洗涤，离心后用适量的细胞转化液重悬菌体；    

（4）转化液转化温度为28-37 ℃，100-260rpm振荡转化24-60h，间隔4h取样，4h取样，转化液中得到木糖醇。

4.根据权利要求2所述的木糖醇基因工程菌和氧化葡糖杆菌混合静止转化D-阿拉伯糖醇生产木糖醇的方法，其特征在于其中步骤（1）所述的种子液培养基组成如下：葡萄糖20-40.0 g/L，胰蛋白胨 1-10.0 g/L，酵母膏2-20.0 g/L；氧化葡糖杆菌斜面培养基：葡萄糖20-40.0 g/L，胰蛋白胨 1-10.0 g/L，酵母膏2-20.0 g/L，琼脂10-20 g/L，其余为水；

其中步骤（2）所述的扩大培养基组成如下：葡萄糖 20-40.0 g/L，酵母膏 2-20.0 g/L，胰蛋白胨 1-10.0 g/L，D-阿拉伯糖醇 5-20.0 g/L，碳酸钙 10-20.0 g/L，其余为水；

其中步骤（3）所述的细胞转化液组成如下：D-阿拉伯糖醇20-40.0 g/L，碳酸钙10-30.0 g/L，乙醇3-8%（V/V），其余为水；

其中步骤（4）所述的LB-Amp培养基组成如下：胰化蛋白胨 10g/L，酵母提取物 5g/L，NaCl 10g/L，氨苄青霉素终浓度50μg/L，其余为水；

其中步骤（5）所述的细胞转化液包组成如下：D-阿拉伯糖醇20-40.0 g/L，碳酸钙10-30.0 g/L，乙醇3-8%（V/V），其余为水。

5.根据权利要求3所述的利用氧化葡糖杆菌混合静止转化D-阿拉伯糖醇生产木糖醇的方法，其特征在于其中步骤（1）所述的种子液培养基组成如下：葡萄糖20-40.0 g/L，胰蛋白胨 1-10.0 g/L，酵母膏2-20.0 g/L；氧化葡糖杆菌斜面培养基：葡萄糖20-40.0 g/L，胰蛋白胨 1-10.0 g/L，酵母膏2-20.0 g/L，琼脂10-20 g/L，其余为水；

其中步骤（2）所述的扩大培养基组成如下：葡萄糖 20-40.0 g/L，酵母膏 2-20.0 g/L，胰蛋白胨 1-10.0 g/L，D-阿拉伯糖醇 5-20.0 g/L，碳酸钙 10-20.0 g/L，其余为水；

其中步骤（3）所述的细胞转化液组成如下：D-阿拉伯糖醇20-40.0 g/L，碳酸钙10-30.0 g/L，乙醇3-8%（V/V），其余为水。