[发明专利]一种快速、准确的检测杂交水稻种子纯度的方法有效
| 申请号： | 201210210815.3 | 申请日： | 2012-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN102912010A | 公开（公告）日： | 2013-02-06 |
| 发明（设计）人： | 彭海;张静;周俊飞 | 申请（专利权）人： | 海南广陵高科实业有限公司;江汉大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京三高永信知识产权代理有限责任公司 11138 | 代理人： | 徐立 |
| 地址： | 57240*** | 国省代码： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 准确 检测 杂交 水稻 种子 纯度 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种快速、准确的检测杂交水稻种子纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：根据种子纯度要求，计算抽样样本量；等量抽样并混合提取DNA或分别提取DNA后再等量混合；按检测位点的碱基序列，设计PCR引物扩增检测位点；回收并纯化PCR扩增产物；利用扩增产物建库并进行高通量测序；根据检测位点序列比例，计算种子纯度。
2.根据权利要求1所述的快速、准确的检测杂交水稻种子纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）计算最小抽样样本量：根据商品种子纯度要求、设定的概率保障和允许的误差，确定最小的样本抽样量；
（2）DNA提取：对每一植株，选取相同部位的等量材料混合后提取DNA；或者，提取每一植株的DNA，再对DNA进行定量抽取后再等量混合；
（3）扩增并回收检测位点：按检测位点的碱基序列，设计引物，对检测位点进行PCR扩增，扩增产物应包含等位位点的差异序列，对PCR产物进行回收纯化；
（4）建库与高通量测测序：按高通量测序流程分别构建亲本基因DNA文库，ePCR并高通量测序；
（5）种子纯度的确定：根据测序的结果，获得父本与母本序列的片段数，由此推算种子纯度。
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