[发明专利]一种利用假丝酵母发酵生产甘油的方法

权利要求书

1.一种利用假丝酵母发酵生产甘油的方法，其特征在于发酵时，假丝酵母在低磷合成培养基、低磷复合培养基和补充微量元素的低磷复合培养基中进行反复分批发酵，酵母细胞不经洗涤可分别回用不同次数。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于种子培养：从刚转接培养好的新鲜斜面上挑取一环菌株，接入500 mL摇瓶中，种子培养基装液量50 mL，于往复式摇床上32℃振荡培养20 h；种子培养基：葡萄糖110g/L，尿素2 g/L，玉米浆9 g/L，自然pH值。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于酵母细胞回用前的分批发酵：按5%的接种量将种子液接入装有100 mL适磷发酵培养基的1000 mL摇瓶中进行分批发酵，发酵条件同种子培养。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于反复分批发酵：当回用前适磷发酵培养基中的分批发酵结束时，将发酵液在2500 r·min 下无菌离心10 min后倒出上清液，菌体不经洗涤全部转接入对应的低磷发酵培养基中，再按种子培养条件于摇床上发酵；当第一次细胞回用分批发酵结束时，按上述回用方法接人另一新鲜低磷发酵培养基中，继续发酵；然后，依此类推。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在合成发酵培养基：葡萄糖210～230 g/L，尿素2 g/L，KH₂PO₄ 0.4 g/L或0.1 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，CaCl₂ 0.1 g/L，MnCl₄ 0.1 g/L，初始pH。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在复合发酵培养基：葡萄糖210～230 g/L，尿素2 g/L，玉米浆12 g/L或2.5 g/L，初始pH。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在补充微量元素的复合发酵培养基：葡萄糖210～230 g/L，尿素2 g/L，玉米浆12 g/L或2.5 g/L，MnCl₄ 0.1，MgSO₄ 2，初始pH。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于Candida glycerinogenes在低磷合成培养基、低磷复合培养基和补充微量元素的低磷复合培养基中进行反复分批发酵，酵母细胞不经洗涤可分别回用12次、7次和13次。