[发明专利]一种利用假丝酵母发酵生产甘油的方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，具体涉及一种利用假丝发酵生产甘油的方法。

背景技术

甘油是一种重要的轻化工原料，广泛应用于化妆品、牙膏、烟草、香精、水性油墨、印染纺织、涂料、合成树脂、皮革、造纸、制药、食品和国防等各个领域的1700多种产品。

在我国，由于受合成洗涤剂的冲击，肥皂行业日渐萎缩，甘油产量大幅下降。因此，利用耐高渗透压酵母发酵生产甘油的产业化前景看好。耐高渗透压酵母Candida glycerinogenes发酵生产甘油具有高产量、高得率和高回收率等优点，在我国得到了较好的工业化应用。但是，耐高渗透压酵母生产甘油的方法主要集中在传统的分批发酵法。为了提高甘油生产能力，降低生产成本，国内外一些研究者对反复分批发酵工艺、连续发酵工艺和固定化发酵工艺生产甘油进行了深入研究，但结果都并不十分理想。因此，本发明在前期研究的基础上，对Candida glycerinogenes反复分批发酵法生产甘油进行详细研究。

本发明提出了一种新的方法，Candida glycerinogenes在低磷合成培养基、低磷复合培养基和补充微量元素的低磷复合培养基中进行反复分批发酵，酵母细胞不经洗涤可分别回用12次、7次和13次，甘油平均产量(或平均得率)增高超过15.0%，甘油平均产率增高达到37.0% 以上，而副产物产生较少。与传统分批发酵相比，Candida glycerinogenes反复分批发酵具有发酵周期短、不需反复培养种子、节省原料成本以及节约能源动力消耗等优点，实现了甘油高产量、高得率和高产率的相对统一。

本发明提供了一种利用假丝酵母发酵生产甘油的方法，本专利假丝酵母为出发菌株，对发酵菌体在不同发酵培养基中的的回用次数进行了研究。

发明内容

1.     一种利用假丝酵母发酵生产甘油的方法，其特征在于发酵时，假丝酵母在低磷合成培养基、低磷复合培养基和补充微量元素的低磷复合培养基中进行反复分批发酵，酵母细胞不经洗涤可分别回用不同次数。

2.     步骤1所述的方法，其特征在于种子培养：从刚转接培养好的新鲜斜面上挑取一环菌株，接入500 mL摇瓶中(种子培养基装液量50 m1)，于往复式摇床上32℃振荡培养20 h(振幅12 cm，振动频率为每分钟115次)。种子培养基(g·L )：葡萄糖110，尿素2，玉米浆9， 自然pH值。

3.     步骤1所述的方法，其特征在于酵母细胞回用前的分批发酵：按5%的接种量将种子液接入装有100 mL适磷发酵培养基的1000 mL摇瓶中进行分批发酵，发酵条件同种子培养。

4.     步骤1所述的的方法，其特征在于反复分批发酵：当回用前适磷发酵培养基中的分批发酵结束时，将发酵液在2500 r·min 下无菌离心10 min后倒出上清液，菌体不经洗涤全部转接入对应的低磷发酵培养基中，再按种子培养条件于摇床上发酵。当第一次细胞回用分批发酵结束(68 h)时，按上述回用方法接人另一新鲜低磷发酵培养基中，继续发酵(56 h)；然后，依此类推。

5.     步骤1所述的方法，其特征在合成发酵培养基(g·L )：葡萄糖210～230，尿素2，KH₂PO₄ 0．4(适磷)或0．1(低磷)，MgSO₄·7H₂O 0.5，CaCl₂ 0.1，MnCl₄ 0.1,初始pH。

6.     步骤1所述的方法，其特征在复合发酵培养基(g·L )：葡萄糖210～230，尿素2，玉米浆12 (适磷)或2.5 (低磷)，初始pH。

7.     步骤1所述的方法，其特征在补充微量元素的复合发酵培养基(g·L )：葡萄糖210～230，尿素2，玉米浆12 (适磷)或2.5 (低磷)，MnCl₄ 0.1，MgSO₄ 2,初始pH。

8.     步骤1所述的方法，其特征在于Candida glycerinogenes在低磷合成培养基、低磷复合培养基和补充微量元素的低磷复合培养基中进行反复分批发酵，酵母细胞不经洗涤可分别回用12次、7次和13次本专利所用的菌株为江南大学发酵甘油研究设计中心提供。

具体实施方式

下面的实施例对本发明作详细说明，但对本发明没有限制。