[发明专利]EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂，其特征在于该试剂包括金结合物垫（3）、硝酸纤维素反应膜（4）、样品垫（2）、风湿因子处理垫（1）、吸水纸（5）和PVC背衬（8）；将风湿因子处理垫、样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸粘附于PVC背衬上，风湿因子处理垫约为样品垫长度的1/2并粘附于PVC背衬上，粘附位置以其中心位置与待粘附的样品垫的中心位置重合为宜；样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸顺次相互叠压粘附于PVC背衬上；样品垫覆盖风湿因子处理垫粘附于PVC背衬上，并叠压金结合物垫2-3mm，金结合物垫叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm并与风湿因子处理垫间隔2-5mm，吸水纸叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm；金结合物垫上包被了抗人IgM单克隆抗体-胶体金的结合物，硝酸纤维素反应膜质控区（7）和检测区（6）位置上分别包被了羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体和特异性的基因重组EB病毒衣壳抗原。

2.根据权利要求1所述的EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂，其特征在于：所述的风湿因子处理垫是包被了风湿因子抗体的硝酸纤维素膜。

3.根据权利要求1所述的EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂，其特征在于：所述检测区包被的EB病毒衣壳抗原为纯化的特异性基因重组抗原。

4.根据权利要求1所述的EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A：制备抗人IgM单克隆抗体：取多份正常人血清，混合，经透析、离心、纯化制得纯度达95%的IgM抗体，以人IgM作为抗原，经脾内注射免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠，取小鼠的免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合，选择性培养、筛选及克隆化获得杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞接种于BALB/c小鼠腹腔制备腹水，以亲和层析法提纯鼠抗人IgM单克隆抗体；

B：制备多克隆抗体：以步骤A所制备的鼠抗人IgM单克隆抗体免疫山羊或兔，取血清纯化后提取到羊抗小鼠IgG多克隆抗体或兔抗小鼠IgG多克隆抗体；

C：制备胶体金：采用柠檬酸三钠还原法制得粒径20～40nm的胶体金颗粒；

D：制备鼠抗人IgM 单克隆抗体-胶体金结合物：用0.1M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至最佳标记pH值，按照0.010～0.030 mg蛋白/mL胶体金的比例加入鼠抗人IgM单克隆抗体，混匀静置，高速离心，弃上清，所得沉淀以十分之一初始胶体金体积的金结合物保存液溶解，制得鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物；其中，金结合物保存液为含2～5%的牛血清白蛋白的pH值为8.0～8.2的0.01～0.02M Tris-HCl缓冲液，并含1～4%的蔗糖、0.5%～1%的酪蛋白钠、1～2%的Tween-20和万分之五的叠氮钠；

E：制备风湿因子处理垫：将抗风湿因子抗体以稀释液稀释至0.5mg～2 mg/mL，均匀喷涂在硝酸纤维素膜上，充分干燥，其中，稀释液为含1～2%海藻糖的pH值为7.2～7.6的0.02～0.05M PBS溶液，并含1～2%的牛血清白蛋白；

F：制备金结合物垫：将步骤D所制备的鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物均匀包被到玻璃纤维膜上，充分干燥；

G：制备硝酸纤维素膜反应膜：将羊抗小鼠IgG多克隆抗体或兔抗小鼠IgG多克隆抗体和重组EB衣壳抗原分别包被在硝酸纤维素膜的质控区和检测区位置，充分干燥；

H：将风湿因子处理垫、样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸粘附于PVC背衬上，风湿因子处理垫约为样品垫长度的1/2并粘附于PVC背衬上，粘附位置以其中心位置与待粘附的样品垫的中心位置重合为宜；样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸顺次相互叠压粘附于PVC背衬上；样品垫覆盖风湿因子处理垫粘附于PVC背衬上，并叠压金结合物垫2-3mm，金结合物垫叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm并与风湿因子处理垫间隔2-5mm，吸水纸叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm，得到试纸板，将试纸板按照需求切割成不同宽度的试纸条。