[发明专利]EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂及其制备方法有效
申请号: | 201210213375.7 | 申请日: | 2012-06-23 |
公开(公告)号: | CN102980997A | 公开(公告)日: | 2013-03-20 |
发明(设计)人: | 吕传臣;罗威;张宁;姜欣;周逸 | 申请(专利权)人: | 北京新兴四寰生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/532 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 100000 北京市*** | 国省代码: | 北京;11 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | eb 病毒 抗原 igm 抗体 胶体 检测 试剂 及其 制备 方法 | ||
1.一种EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂,其特征在于该试剂包括金结合物垫(3)、硝酸纤维素反应膜(4)、样品垫(2)、风湿因子处理垫(1)、吸水纸(5)和PVC背衬(8);将风湿因子处理垫、样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸粘附于PVC背衬上,风湿因子处理垫约为样品垫长度的1/2并粘附于PVC背衬上,粘附位置以其中心位置与待粘附的样品垫的中心位置重合为宜;样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸顺次相互叠压粘附于PVC背衬上;样品垫覆盖风湿因子处理垫粘附于PVC背衬上,并叠压金结合物垫2-3mm,金结合物垫叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm并与风湿因子处理垫间隔2-5mm,吸水纸叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm;金结合物垫上包被了抗人IgM单克隆抗体-胶体金的结合物,硝酸纤维素反应膜质控区(7)和检测区(6)位置上分别包被了羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体和特异性的基因重组EB病毒衣壳抗原。
2.根据权利要求1所述的EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂,其特征在于:所述的风湿因子处理垫是包被了风湿因子抗体的硝酸纤维素膜。
3.根据权利要求1所述的EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂,其特征在于:所述检测区包被的EB病毒衣壳抗原为纯化的特异性基因重组抗原。
4.根据权利要求1所述的EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
A:制备抗人IgM单克隆抗体:取多份正常人血清,混合,经透析、离心、纯化制得纯度达95%的IgM抗体,以人IgM作为抗原,经脾内注射免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠的免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合,选择性培养、筛选及克隆化获得杂交瘤细胞,将杂交瘤细胞接种于BALB/c小鼠腹腔制备腹水,以亲和层析法提纯鼠抗人IgM单克隆抗体;
B:制备多克隆抗体:以步骤A所制备的鼠抗人IgM单克隆抗体免疫山羊或兔,取血清纯化后提取到羊抗小鼠IgG多克隆抗体或兔抗小鼠IgG多克隆抗体;
C:制备胶体金:采用柠檬酸三钠还原法制得粒径20~40nm的胶体金颗粒;
D:制备鼠抗人IgM 单克隆抗体-胶体金结合物:用0.1M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至最佳标记pH值,按照0.010~0.030 mg蛋白/mL胶体金的比例加入鼠抗人IgM单克隆抗体,混匀静置,高速离心,弃上清,所得沉淀以十分之一初始胶体金体积的金结合物保存液溶解,制得鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物;其中,金结合物保存液为含2~5%的牛血清白蛋白的pH值为8.0~8.2的0.01~0.02M Tris-HCl缓冲液,并含1~4%的蔗糖、0.5%~1%的酪蛋白钠、1~2%的Tween-20和万分之五的叠氮钠;
E:制备风湿因子处理垫:将抗风湿因子抗体以稀释液稀释至0.5mg~2 mg/mL,均匀喷涂在硝酸纤维素膜上,充分干燥,其中,稀释液为含1~2%海藻糖的pH值为7.2~7.6的0.02~0.05M PBS溶液,并含1~2%的牛血清白蛋白;
F:制备金结合物垫:将步骤D所制备的鼠抗人IgM单克隆抗体-胶体金结合物均匀包被到玻璃纤维膜上,充分干燥;
G:制备硝酸纤维素膜反应膜:将羊抗小鼠IgG多克隆抗体或兔抗小鼠IgG多克隆抗体和重组EB衣壳抗原分别包被在硝酸纤维素膜的质控区和检测区位置,充分干燥;
H:将风湿因子处理垫、样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸粘附于PVC背衬上,风湿因子处理垫约为样品垫长度的1/2并粘附于PVC背衬上,粘附位置以其中心位置与待粘附的样品垫的中心位置重合为宜;样品垫、金结合物垫、硝酸纤维素反应膜和吸水纸顺次相互叠压粘附于PVC背衬上;样品垫覆盖风湿因子处理垫粘附于PVC背衬上,并叠压金结合物垫2-3mm,金结合物垫叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm并与风湿因子处理垫间隔2-5mm,吸水纸叠压硝酸纤维素反应膜2-3mm,得到试纸板,将试纸板按照需求切割成不同宽度的试纸条。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于北京新兴四寰生物技术有限公司,未经北京新兴四寰生物技术有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210213375.7/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。