[发明专利]EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，特别是涉及一种用胶体金免疫层析法检测EB病毒衣壳抗原IgM抗体的试剂及其制备方法。

 

背景技术

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一种嗜人类淋巴细胞的疱疹病毒，主要通过人类唾液传播，也可经输血传染，是疱疹病毒科γ亚科中唯一能够引起人类感染的淋巴滤泡病毒。EB病毒与包括传染性单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、霍金奇淋巴瘤等有密切的关系，引发了全球癌症的1%，并占所有感染性癌症的5.6%，根据国际癌症研究署对致癌因子的分类标准，EB病毒被列入第一组致癌因子。

人体感染EB病毒后能诱生抗核抗原（EBna）、早期抗原（EA）、衣壳抗原（VCA）、膜抗原（MA）及淋巴细胞识别膜抗原（lydma）等抗原的相应抗体（IgG、IgA、IgM等抗体）。其中，IgM/VCA抗体出现最早，90～94%的EB病毒感染者在感染初期能够被检测到，是EB病毒急性感染，也是复发感染的重要标志，是EB病毒感染的早期诊断不可缺少的重要指标。 

目前，鼻咽癌的诊断仍须依据内窥镜和活检组织病理检查，但这些方法具有一定的创伤性，在对广大人群进行筛查时会受到一定的限制。因此，临床上多采用实验室诊断方法。常规的EB病毒实验室诊断方法主要有病毒分离、检测病毒蛋白质及核酸、EBV血清学实验检测抗体等几种方法。病毒分离法是采用咽漱液直接接种人脐带血淋巴细胞，根据转化淋巴细胞的效率来决定病毒的量。该方法耗时并且需要特殊的组织培养条件，故不适合作为常规临床检测使用；检测病毒蛋白质及核酸是，利用核酸杂交和PCR或RT-PCR方法，在病变组织内检测病毒基因组核酸和病毒基因组转录产物，在检测条件和技术等方面要求较高，故临床常规检测中不宜采用；血清学诊断主要通过酶联免疫法等方法检测血清中是否存在抗VCA-IgM/IgA抗体、抗核抗原（EBNA）抗体等特异性抗体，由于其具有灵敏度高、特异性好和易于操作等优点，是目前实验室最常用的方法之一，对疾病的诊断有一定的参考价值。目前，国内外对EB-VCA-IgM检测的方法主要有间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法及金免疫渗滤法等。

间接免疫荧光法有较高的灵敏度和特异性，被作为EB病毒诊断的“金标准”。但是该方法需要大量的专业技术知识，且细胞培养耗时多，需要用荧光显微镜这样昂贵的仪器，且受显微镜观察的主观影响较大，所以在实验室使用中受到限制。

酶免疫法的灵敏度和特异性稍低于间接免疫荧光法，有学者研究，通过增大抗IgM抗体的包被量或可以提高检测的灵敏度。但是由于单位微孔内蛋白的载量有限，这一措施较难实现。

金免疫渗滤法是采用硝酸纤维素膜作为载体、胶体金作为示踪物的一种检测方法，具有高特异性和高灵敏度，但该方法操作步骤繁琐，在临床试用过程中易出现混乱。

此外，以上三种方法均受类风湿因子阳性血清标本的影响，易造成假阳性或漏检，需要预先通过超速离心或免疫吸附处理转阴后检测特异性IgM抗体，很难实现一次实验完成检测。

而同样使用胶体金作为示踪物的胶体金免疫层析法未见相应的试剂，该方法操作简便、快速、稳定性好，易于进行单份样本检测，且不需特殊仪器进行检测；与渗滤法相比，不需要繁琐的操作步骤，且由于示踪物为固相易于保存、稳定性好。

 

发明内容

本发明的目的是为了克服当前检测EB病毒衣壳抗原IgM抗体技术在推广使用中存在的缺陷，提供一种操作简便、不需要特定仪器设备辅助、不需要对检测人员进行特殊培训的快速检测试剂并且有效降低检测成本，同时提供该试剂的制备方法。