[发明专利]一种提取样本中被分析物质的试剂以及提取的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种在检测前处理样本的试剂以及处理方法，特别的，本发明涉及一种在用免疫方法检测样本中被分析物质前处理样本的试剂以及处理方法。

背景技术

免疫学检测技术首先从临床检验领域发展起来，其主要检测样本为血液，尿液，唾液等液体类样本。一般这些液体类样本可以直接被用于免疫学检测。而在食品安全检测领域，一般需要将被分析物质，例如一些小分子物质，从组织样本，例如肝脏、脂肪、肾脏等等，中先提取出来，再用于后续的检测。

在被分析物质提取方面，还存在一些传统的方法，例如，索氏提取法，它适用于低灵敏度检测手段的项目，需要样本中的被检测物质尽量被提取出来，对其提取后的纯度亦有要求，以满足如传统的光谱测定等常规方法。再例如液液萃取法，该方法在弱极性和强极性溶剂之间萃取，但是需要大量的有机溶剂才能满足检测的要求。

目前国际上公认的农兽药残留检测的确认方法为仪器方法，包括液相色谱，气相色谱，气质联用和液质联用。这方面，为了适应仪器的要求，常使用C18或HLB（亲水亲脂共聚物）的固相萃取柱来净化样本，另外还有分子印迹聚合材料（MIP）作为富集材料（与目标分子专一性结合的功能基的三位空穴的高聚物），它实质上是一种仿生学原理，即人工模拟抗体来识别和捕获具有空间互补的表位。近年来，一些大的生物公司，利用抗体技术制备免疫亲和色谱，用于仪器方法的检测前的样本净化。

与这些这传统的方法相比，目前，组织样本中的被分析物质的提取方法在提取效率，使用溶剂量上都有较大改善，但还是存在效率低下的问题。有学者也在探索提高效率的方法，如高通量，96孔萃取固相萃取装置，一天只能处理24个样本，效率较低。

关于使用仪器进行分析使用的前处理技术，目前还在不断取得进展，如超临界萃取，凝胶渗透色谱，加速溶剂萃取，固相微萃取，基质固相微萃取等。

总之，对于传统的仪器检测，复杂的组织样本中的被分析物质的前处理方法是个极大的考验，甚至，有些前处理方法仅适用于一种组织的检测，而另一种组织则不能适用。这主要的原因是仪器本身的检测物质手段为色谱和质谱特征，这些特征的信噪比在非常低的浓度（10^-9摩尔/升）下难于稳定维系。

目前，对于食品安全检测尽管出现了一些免疫试剂，例如ELISA试剂盒，胶体金试纸等，一定程度上解决了检测的效率和准确性问题，但在前处理方面仍不能做到即高效又有效。关于如何在复杂的样本中提取小分子，目前的免疫学方法还主要参考趋于成熟的仪器法前处理方法，甚至许多方法是直接参考仪器方法的。

以氯霉素为例，农业部1025公告-26-2008动物源食品中氯霉素残留检测酶联免疫吸附法的肌肉，肝脏和鱼虾样本的前处理方法为称取试料3g，加入乙酸乙酯（有机溶剂）6ml振荡，离心，取上层有机相，氮气吹干，残渣用正己烷溶解，再加入缓冲溶液强烈振荡，离心，取下层（非正己烷）层液体进行免疫分析。该方法与农业部公告781-1-2006动物源食品中氯霉素残留量的测定气相色谱－质谱法，农业部781号公告-2-2006动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱－串联质谱法，农业部1025号公告-21-2008动物源食品中氯霉素残留检测气相色谱法的提取方法基本一致，其核心仍然是使用乙酸乙酯将目标分子氯霉素同杂质分开，在保证有效萃取的前提下，利用氮气吹干去除乙酸乙酯，再利用不同的方法来排除对后续检测的干扰，从而达到一定的准确度。

以β-激动剂类莱克多巴胺为例，农业部1025号公告-6-2008动物性食品中莱克多巴胺残留检测酶联免疫吸附法采用乙腈做萃取组织中的莱克多巴胺小分子，经过氮气吹干，复溶步骤得到可用于酶联免疫法测定的样本，与农业部1025号公告-18-2008动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱－串联质谱法中的提取方法流程基本类似，即有机溶剂萃取，去除有机溶剂，再将残渣溶解在适于仪器检测的溶剂中上机测试。

以硝基呋喃类代谢物为例，DB33T 744-2009水产品中呋喃唑酮、呋喃它酮代谢物的快速测定酶联免疫法中先对样本进行衍生化，再使用乙酸乙酯将呋喃类衍生物萃取出来，去除乙酸乙酯，该处使用氮气吹干，再利用正己烷和生物相容性缓冲溶液将目标物质溶解出来，用于免疫测定。该种方法与农业部1077号公告-2-2008水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定高效液相色谱法，农业部783号公告-1-2006水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱－串联质谱法的提取方法基本都遵循萃取和氮气或旋转蒸发仪等方法去除乙酸乙酯，再进行下一步的测定步骤。