[发明专利]定点突变和定点修饰的病毒膜蛋白、其制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201210214038.X | 申请日： | 2012-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN102838663A | 公开（公告）日： | 2012-12-26 |
| 发明（设计）人： | 周德敏;郑永祥;赵传科;张传领;俞飞;肖苏龙;张礼和 | 申请（专利权）人： | 北京大学 |
| 主分类号： | C07K14/145 | 分类号： | C07K14/145;C12N15/47;C12N15/63;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/70;C07K1/14 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人： | 李英 |
| 地址： | 100871*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 定点 突变 修饰 病毒 膜蛋白 制备 方法 及其 应用 | ||
技术领域
发明涉及在水泡性口炎病毒的包膜蛋白G（VSV G）基因的特定位点引入琥珀密码子TAG，利用正交的氨酰tRNA合成酶-tRNA将具有光交联性质的非天然氨基酸DiZPK定点突变到VSV G的特定位点。在病毒与宿主细胞相互作用过程中，用365nm紫外光引发DiZPK的光交联反应，在VSV G与相互作用蛋白间形成共价键，避免了相互作用的解离，为病毒与宿主间蛋白相互作用的研究提供有力的手段。
背景技术
水泡性口炎病毒及其膜蛋白VSVG
水泡性口炎病毒（VSV）是弹状病毒科（Rhabdoviridae）的一种，其是单负链RNA包膜病毒，基因组大小在11,000-12,000个碱基；编码5个蛋白质分子:L蛋白，磷酸蛋白，M蛋白，N蛋白，G蛋白；这五种蛋白的组成VSV结构如图1所示。其中G蛋白（VSV G）被命名为Ⅲ型病毒融合蛋白，在病毒表面形成钉状三聚体结构，介导病毒与宿主细胞受体的识别和宿主细胞对病毒的内吞，以及病毒包膜与宿主细胞膜的融合，在VSV的感染过程中起到首要作用。VSV G（Indiana）共有495个氨基酸残基，其中N端的446个氨基酸残基在病毒膜外，该部分也是病毒抗体的识别区域。
编码VSVG基因的序列：
AAGTTCACCATAGTTTTTCCACACAACCAAAAAGGAAACTGGAAAAATGTTCCTTCTAATTACCATTATTGCCCGTCAAGCTCAGATTTAAATTGGCATAATGACTTAATAGGCACAGCCTTACAAGTCAAAATGCCCAAGAGTCACAAGGCTATTCAAGCAGACGGTTGGATGTGTCATGCTTCCAAATGGGTCACTACTTGTGATTTCCGCTGGTATGGACCGAAGTATATAACACATTCCATCCGATCCTTCACTCCATCTGTAGAACAATGCAAGGAAAGCATTGAACAAACGAAACAAGGAACTTGGCTGAATCCAGGCTTCCCTCCTCAAAGTTGTGGATATGCAACTGTGACGGATGCCGAAGCAGTGATTGTCCAGGTGACTCCTCACCATGTGCTGGTTGATGAATACACAGGAGAATGGGTTGATTCACAGTTCATCAACGGAAAATGCAGCAATTACATATGCCCCACTGTCCATAACTCTACAACCTGGCATTCTGACTATAAGGTCAAAGGGCTATGTGATTCTAACCTCATTTCCATGGACATCACCTTCTTCTCAGAGGACGGAGAGCTATCATCCCTGGGAAAGGAGGGCACAGGGTTCAGAAGTAACTACTTTGCTTATGAAACTGGAGGCAAGGCCTGCAAAATGCAATACTGCAAGCATTGGGGAGTCAGACTCCCATCAGGTGTCTGGTTCGAGATGGCTGATAAGGATCTCTTTGCTGCAGCCAGATTCCCTGAATGCCCAGAAGGGTCAAGTATCTCTGCTCCATCTCAGACCTCAGTGGATGTAAGTCTAATTCAGGACGTTGAGAGGATCTTGGATTATTCCCTCTGCCAAGAAACCTGGAGCAAAATCAGAGCGGGTCTTCCAATCTCTCCAGTGGATCTCAGCTATCTTGCTCCTAAAAACCCAGGAACCGGTCCTGCTTTCACCATAATCAATGGTACCCTAAAATACTTTGAGACCAGATACATCAGAGTCGATATTGCTGCTCCAATCCTCTCAAGAATGGTCGGAATGATCAGTGGAACTACCACAGAAAGGGAACTGTGGGATGACTGGGCACCATATGAAGACGTGGAAATTGGACCCAATGGAGTTCTGAGGACCAGTTCAGGATATAAGTTTCCTTTATACATGATTGGACATGGTATGTTGGACTCCGATCTTCATCTTAGCTCAAAGGCTCAGGTGTTCGAACATCCTCACATTCAAGACGCTGCTTCGCAACTTCCTGATGATGAGAGTTTATTTTTTGGTGATACTGGGCTATCCAAAAATCCAATCGAGCTTGTAGAAGGTTGGTTCAGTAGTTGGAAAAGCTCTATTGCCTCTTTTTTCTTTATCATAGGGTTAATCATTGGACTATTCTTGGTTCTCCGAGTTGGTATCCATCTTTGCATTAAATTAAAGCACACCAAGAAAAGACAGATTTATACAGACATAGAGATGAACCGACTTGGAAAGTGA（SEQ ID NO：1）
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