[发明专利]具有延长的体内半衰期的生理学活性多肽缀合物

权利要求书

1.一种蛋白质缀合物，其包括彼此以如下顺序共价连接的i)选自由人生长激素、干扰素α、粒细胞集落刺激因子、促红细胞生成素和Fab’所构成的组中的生理学活性多肽，ii)聚乙二醇，以及iii)免疫球蛋白G，并具有生理学活性多肽的延长的体内半衰期。

2.权利要求1的蛋白质缀合物，其中所述聚乙二醇在其两末端具有两个反应基团，通过这两个反应基团，该聚乙二醇被共价地连接到生理学活性多肽和免疫球蛋白上。

3.权利要求1的蛋白质缀合物，其中所述免疫球蛋白G选自由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4所构成的组。

4.权利要求1的蛋白质缀合物，其中所述免疫球蛋白G是人免疫球蛋白G。

5.权利要求1的蛋白质缀合物，其中所述免疫球蛋白G选自由具有野生型糖基化的免疫球蛋白G、具有增加或减少的糖基化程度的免疫球蛋白G和无糖基化的免疫球蛋白G所构成的组。

6.权利要求5的蛋白质缀合物，其中通过选自由化学方法、酶学方法和生物技术方法所构成组的方法来进行免疫球蛋白G的糖基化程度的增加或减少或无糖基化。

7.权利要求2的蛋白质缀合物，其中所述聚乙二醇的反应基团选自由乙醛、丙醛、丁醛、马来酰亚胺和琥珀酰亚胺衍生物所构成的组。

8.权利要求7的蛋白质缀合物，其中所述琥珀酰亚胺衍生物是琥珀酰亚胺基丙酸酯、琥珀酰亚胺基羧甲基、羟基琥珀酰亚胺基或琥珀酰亚胺基碳酸酯。

9.权利要求7的蛋白质缀合物，其中所述聚乙二醇在其两末端具有乙醛基。

10.权利要求1的蛋白质缀合物，其中所述聚乙二醇在其末端分别被共价地连接到免疫球蛋白的氨基末端、赖氨酸残基、组氨酸残基或半胱氨酸残基以及生理学活性多肽的氨基末端、赖氨酸残基、组氨酸残基或半胱氨酸残基。

11.一种制备权利要求1的蛋白质缀合物的方法，该方法包括：

(a)将生理学活性多肽和免疫球蛋白G与在其两末端具有反应基团的聚乙二醇共价连接，其中所述生理学活性多肽选自由人生长激素、干扰素α、粒细胞集落刺激因子、促红细胞生成素和Fab’所构成的组；和

(b)分离含有生理学活性多肽、聚乙二醇和免疫球蛋白G的蛋白质缀合物，其中所述生理学活性多肽、聚乙二醇和免疫球蛋白G以活性多肽、聚乙二醇和免疫球蛋白G这种顺序共价相连。

12.权利要求11的方法，其中步骤(a)包括：

(a1)将聚乙二醇的一个末端与免疫球蛋白G或生理学活性多肽共价地结合；

(a2)从所得的反应混和物中分离出复合物，所述复合物包含与免疫球蛋白G或生理学活性多肽相结合的聚乙二醇；和

(a3)将上述复合物的聚乙二醇的游离末端与免疫球蛋白G或生理学活性多肽共价地结合，以产生蛋白质缀合物，该缀合物包含彼此共价相连的生理学活性多肽、聚乙二醇和免疫球蛋白G。

13.权利要求12的方法，其中在步骤(a1)中的生理学活性多肽与聚乙二醇的摩尔比是在从1:2.5到1:5的范围内。

14.权利要求12的方法，其中在步骤(a1)中的免疫球蛋白G与聚乙二醇的摩尔比是在从1:5到1:10的范围内。

15.权利要求12的方法，其中在步骤(a2)中所获得的复合物与步骤(a3)中的生理学活性多肽或免疫球蛋白G的摩尔比是在从1:1到1:3的范围内。

16.权利要求12的方法，其中在存在还原剂的条件下实施步骤(a1)和(a3)。

17.权利要求16的方法，其中所述还原剂是氰基硼氢化钠、硼氢化钠、二甲胺硼酸盐或吡啶硼酸盐。

18.一种具有半衰期被延长的生理学活性多肽的药物组合物，其包含权利要求1-10中任一项的蛋白质缀合物和药学上可接受的载体。

19.权利要求11的方法，其中所述免疫球蛋白G选自由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4所构成的组。

20.权利要求19的方法，其中所述免疫球蛋白G是人免疫球蛋白G。