[发明专利]具有延长的体内半衰期的生理学活性多肽缀合物

说明书

本申请是申请日为2004年03月13日的申请号为200480006826.3标题为“具有延长的体内半衰期的生理学活性多肽缀合物”的申请的分案申请

技术领域

本发明涉及一种具有延长的体内半衰期的长效蛋白及其制备方法。

背景技术

多肽在血液、肝脏或肾脏内容易发生变性或酶解。因为多肽的低稳定性，为了保持活性物质的有效血浆浓度，所以要求以持续的频率施用对患者施用多肽药物。此外，因为多肽药物通常是通过注射被施用.施用，所以多肽药物的频繁注射给患者造成了相当的不便。因此，已有许多研究在开发具有被提高的血液循环半衰期并同时保持其高药理功效的多肽药物。这些想得到的多肽药物也应当满足了对提高的血清稳定性、高活性、对各种多肽的可应用性以及当注射到患者体内时诱发非所需的免疫应答的低可能性的要求。

用于提高蛋白质稳定性的最常用的方法之一是用高度可溶的大分子，例如聚乙二醇（“PEG”），对多肽进行化学修饰，该大分子阻止了多肽与蛋白酶的接触。也熟知的是当PEG被特异地或非特异地连接到多肽药物时，PEG增加了多肽药物的可溶性并防止其被水解，从而增加了多肽药物的血清稳定性，并且因为它的低抗原性而不引起任何免疫应答（Sada et al., J. Fermentation Bioengineering,1991,71:137-139）。但是，这些PEG化（pegylated）多肽所具有的缺点是当PEG的分子量增加时降低了活性物质的活性和产量。在US5,738,846和WO 92/16221中分别公开了与两个被激活的PEG缀合的干扰素和被连接到两个具有不同活性的多肽上的PEG间隔物；但是在延长生理学活性多肽的体内活性方面，它们没有显示出任何突出的效果。

也报道了通过经异质双功能(hetero-bifunctional)PEG将重组人粒细胞集落刺激因子（“G-CSF”）共价连接到白蛋白上可延长G-CSF的循环半衰期（Kinstler et al., Pharmaceutical Research,1995,12(12):1883-1888）。但是，经修饰的G-CSF-PEG-白蛋白的稳定性只比真G-CSF（authentic G-CSF）高4倍，因此它还不能被投入到实践应用中。

作为另一种增强生理学活性多肽的体内稳定性的方法，通过利用重组技术在转化体中生成了与稳定的蛋白质融合的活性多肽。例如，已知白蛋白是用于增强与其融合的多肽的稳定性的最有效的蛋白质中的一种，已经报道的这样的融合蛋白有很多（WO93/15199和WO93/15200，和EP413,622）。但是，与白蛋白结合的融合蛋白仍有活性被降低的问题。

US5,045,312公开了一种为了增强生长激素的活性，使用交联剂，例如碳化二亚胺、戊二醛、酰基氯等将生长激素缀合到牛血清白蛋白或鼠免疫球蛋白上的方法。但是，这一方法是单独地针对于增强靶生长激素的活性。另外，使用化学化合物例如碳化二亚胺、戊二醛、酰基氯等作为交联剂是不利的，这是由于它们强烈的毒性和反应的非特异性。

已经报道了免疫球蛋白能用作抗体以呈现出依赖抗体的细胞毒性（ADCC）和依赖补体的细胞毒性（CDC）的抗体，糖链在ADCC及CDC中发挥了重要作用（Burton D.,Molec.Immun.22,161-206,1985）。尽管缺失糖链，无糖基化免疫球蛋白具有与糖基化免疫球蛋白相似的血液半衰期，但是由于去糖基化，它对补体或受体的亲和力下降了10到1000倍（Waldmann H.,Eur.J.Immnunol.23,403-411,1993;Morrison S.,J.Immunol.143,2595-2601,1989）。

尽管在将生理学活性多肽与各种大分子进行组合方面已经进行了很多的尝试，但是所有的尝试都不能达到同时增加稳定性和活性。

作为一种用于增强活性多肽的稳定性并同时保持其体内活性的改进方法，本发明提供了一种蛋白质缀合物，其包括彼此共价连接的一种生理学活性多肽、一种非肽聚合物和一种免疫球蛋白缀合物。

发明概述

因此，本发明的第一个目的是提供一种具有体内半衰期被延长的生理学活性多肽的、且不诱导患者体内的免疫应答、同时将多肽活性的减低最小化的蛋白质缀合物。

本发明的另一个目的是提供一种用于制备包括共价连接的一种生理学活性多肽、一种生物相容性的非肽聚合物和一种免疫球蛋白的蛋白质缀合物的方法。

本发明的另一个目的是提供一种包括具有延长的体内半衰期的所述的生理学活性多肽的药物组合物。