[发明专利]一种可保持活性的蛋白质顺序提取方法

权利要求书

1.一种可保持活性的蛋白质顺序提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将动物组织除净残留的血液；

2)将组织切片，用生理盐水清洗出去血液残留，在液氮条件下进行研磨，得到粗粉，粒径在0.1-1mm，向其中加入盐溶液；粗粉1g所需盐溶液4-10ml；

3)超声处理20-90S，每超声5-10S、间隔停止5-10S；然后室温冰上孵育10-60min；得匀浆液；

4)将步骤3）所得匀浆液于10000-20000r/min条件下离心5-40min，取上清液，得提取液备用；

5)重复步骤3）和步骤4）2-4次，将所得提取液合并作为提取物A；

6)向步骤5）所得残渣中加入酸性溶剂；残渣1g所需酸性溶剂4-10ml；按步骤3）至步骤5）操作，获得提取液B；

7)向步骤6）所得残渣中加入碱性溶剂；残渣1g所需碱性溶剂4-10ml；按步骤3）至步骤5）操作，获得提取液C；

8)向步骤7）所得残渣中加入疏水性溶剂；残渣1g所需疏水性溶剂4-10ml；按步骤3）至步骤5）操作，获得提取液D；

9)将提取液A、B、C、D分别置于超滤离心管中，截留分子量为3000-10000，在500-5000r/min范围内离心30min-6h；

10)将过滤得到的浓缩液冷冻干燥，收集后置于-80℃冰箱保存，获得4种蛋白质产品。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：

盐溶液为下列溶剂中的一种，氯化钠溶液、磷酸缓冲溶液或PBS溶液；浓度范围在50mM-500mM之间，pH为6-8。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：

酸性溶剂为下列溶剂中的一种，醋酸-醋酸钠缓冲溶液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液或磷酸缓冲溶液；浓度范围在50mM-500mM之间，pH为2-5。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：

碱性溶剂为下列溶剂中的一种，Tris-HCl缓冲溶液或甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶；浓度范围在50mM-500mM之间，pH为9-12。

5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

疏水性溶剂为下列溶剂中的一种，丁醇水溶液、去氧胆酸钠、charps或TritonX-100；浓度范围在0.5-10％之间。

6.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

提取过程均在4℃条件下进行。

7.按照权利要求1、2、3、4或5所述的制备方法，其特征在于：于所述的盐溶液、酸性溶剂、碱性溶剂、疏水性溶剂中均含有蛋白酶抑制剂。蛋白酶抑制剂下列物质中的几种构成的混合物：AEBSF、Aprotinin、Bestatin、Sodium Pyrophosphate、E-64、EDTA、Leupeptin、Pepstatin A、PMSF，浓度范围在1-200mg/ml之间。

8.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述动物组织为肌肉组织和/或软骨组织。

9.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述动物组织为鹿茸时，其步骤1）如下：

1）将动物组织经真空泵抽净残留的鹿血，用生理盐水清洁鹿茸表面并用75％酒精消毒；将鹿茸组织切片，用生理盐水清洗出去血液残留，在液氮条件下进行研磨，得到鹿茸粗粉，粒径在0.1-1mm，向鹿茸中加入盐溶液。