[发明专利]一种液相色谱法分离测定L-精氨酸左那氟沙星及其光学异构体的方法

说明书

技术领域

本发明属药物领域，具体涉及用液相色谱法分离测定L-精氨酸左那氟沙星及其光学异构体的方法。 

背景技术

喹诺酮类药物现在已发展到四代，第一代以萘啶酸为代表，第二代以吡哌酸为代表，仅对革兰氏阴性菌有效，第三代是此类药物发展的高峰期，出现了大量新药，并且是广谱抗菌，这其中以诺氟沙星，环丙沙星等为代表。第四代喹诺酮类抗生素则是在第三代广谱的基础上又进一步扩大了抗菌谱，使之可对抗支原体和衣原体感染。 

国内抗生素研发一直比较热门，目前市场上应用最多的是第三代喹诺酮类药物。那氟沙星由日本大冢公司开发，属于第三代喹诺酮抗菌药，外用治疗痤疮和毛囊炎。1993年首次在日本上市（商品名：Acuatim），2004年在德国上市（商品名：Nadixa），2005年在中国上市（商品名：依尤宁，1％软膏）。 

那氟沙星结构中存在一个手性碳原子，因此具有一组立体构型不同的光学异构体，即(R)-那氟沙星和(S)-那氟沙星，具有有效的生物活性的是(S)-那氟沙星，研究表明，S-型异构体是主要起效的成分，S-型异构体抗菌活性是消旋体的2倍，是R-异构体的64～256倍。与氨基酸成盐后，增加了水溶性从而提高了生物利用度，增强了稳定性，降低了血管刺激性等副作用。L-精氨酸左那氟沙星是其中S-型异构体的氨基酸盐类，化学名为S-(—)-9-氟-6，7-二氢-8-(4-羟基-1-哌啶基)-5-甲基-1-氧代-1H，5H-苯并〔i，j〕喹嗪-2-羧酸精氨酸盐。除左那氟沙星外，其光学异构体被列为 L-精氨酸左那氟沙星的杂质。 

对于L-精氨酸左那氟沙星的光学异构体为杂质，在生产L-精氨酸左那氟沙星过程中需要进行质量控制。手性药物的光学异构体的分离一直是手性药物质量控制的难点。因此，实现L-精氨酸左那氟沙星与其光学异构体的分离测定在于L-精氨酸左那氟沙星质量控制方面具有现实意义。  

发明内容

 本发明的目的是提供一种用手性色谱柱分离测定L-精氨酸左那氟沙星及其光学异构体杂质的高效液相色谱方法，可以将L-精氨酸左那氟沙星与其光学异构体进行有效分离，从而可以准确控制L-精氨酸左那氟沙星的质量，从而实现L-精氨酸左那氟沙星与其光学异构体的分离测定。 

本发明所说的用液相色谱方法分离测定L-精氨酸左那氟沙星及其光学异构体杂质的方法，是以三(3,5－二甲苯基）-氨基甲酸酯直链淀粉[Amylose tris(3,5-dimethylphenyl carbamate)]为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液中包含有机酸。这里所说的液相色谱法包括高效液相色谱法或高效液相色谱法-质谱法联用。 

上述所说的手性色谱柱选自牌号为CHIRALPAK AD和CHIRALPAK AD-H的色谱柱。 

本发明的低级醇选自以下溶剂：甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇，或其混合物，优选为乙醇或异丙醇。 

    本发明所述的方法，其流动相正己烷-低级醇溶液的体积比为80:20～50:50。 

上述所说的低级醇溶液中包含的有机酸选自甲酸、乙酸和三氟乙酸，有机酸的浓度占低级醇溶液的体积百分比（V/V)为0.1～1%。 

本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现： 

1）取L-精氨酸左那氟沙星或含L-精氨酸左那氟沙星的制剂适量，用乙醇或甲醇溶解样品，并配制成每1ml中含左那氟沙星0.2～5mg的样品溶液；

2）设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1.0ml/min；检测波长为215～250nm，最佳检测波长为235nm；色谱柱柱温箱温度为20～50℃，最佳柱温为30℃；

3)取1）的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，完成L-精氨酸左那氟沙星与光学异构体的分离测定。

其中： 

高效液相色谱仪：戴安P680型高效液相色谱仪；

色谱柱：CHIRALPAK AD-H手性色谱柱（250mm×4.6mm）；

柱温：30℃；

流动相：正己烷-乙醇（含0.1％的三氟乙酸）=（65:35）；

流量：1.0ml/min；

检测波长：235nm；

进样体积：20μl ；

所述的分离测定方法，照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）测定。