[发明专利]基于阴离子交换柱高效分离出高活性水蛭素的生产工艺

权利要求书

1.一种基于阴离子交换柱高效分离出高活性水蛭素的生产工艺，其特征在于包括下述步骤：

（1）从蚂蝗粉中粗提水蛭素：按照材料重量的2-6倍加入三氯乙酸提取液，离心，上清备用；沉淀继续重复提取两次，所有上清液混合，调节上清液pH至4.0左右，加三倍冷丙酮沉淀，0-8℃静置过夜，回收上清中的丙酮，沉淀去丙酮备用；

（2）DEAE-硅胶柱分离纯化：向上述步骤(1)所得沉淀中加1-10倍量的超纯水，充分溶解，用DEAE-硅胶柱中压液相色谱进行分离纯化，并收集水蛭素峰位置洗脱液，备用；

（3）脱盐浓缩：把步骤(2)中所得上清液进行透析，中间换水2-8次，每次间隔不小于2h；透析过的上清液通过旋转蒸发(40-70℃，0-250r/min)进行浓缩，0-8℃冷藏备用；

（4）于冻干机冻干，收集后密封保存。

2.根据权利要求1所述的基于阴离子交换柱高效分离出高活性水蛭素的生产工艺，其特征在于：步骤（2）中所述的DEAE-硅胶柱的填料为大孔硅胶，孔径在300 -600 ?，其表面涂覆一层含二乙基胺的聚合物，填料粒度为30-150μm。

3.根据权利要求1所述的基于阴离子交换柱高效分离出高活性水蛭素的生产工艺，其特征在于：所述的含二乙基胺的聚合物为甲基丙烯酸二乙基氨基乙脂聚合物以及二乙基氨基乙基取代的纤维素。

4.根据权利要求1所述的基于阴离子交换柱高效分离出高活性水蛭素的生产工艺，其特征在于：分离洗脱方法简便，对环境无污染，所述步骤（2）中DEAE-硅胶柱分离纯化是通过调节流动相的离子浓度进行梯度洗脱的，柱温为常温，采用紫外检测器对样品溶液进行液相色谱检测。

5.根据权利要求1所述的基于阴离子交换柱高效分离出高活性水蛭素的生产工艺，其特征在于：步骤（3）中所述透析是使用的透析膜是截留分子量小于等于7000的透析袋，透析时间最少24h；浓缩是在40-70℃范围下旋转蒸发去除30%~80%的水分，得浓缩液。