[发明专利]一种用于克隆含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的DNA分子及克隆方法有效
| 申请号： | 201210223195.7 | 申请日： | 2012-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN102732525A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 王建南;杨云星;黄海燕;李明忠;卢神州 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 常亮 |
| 地址： | 215123 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 克隆 精氨酸 甘氨酸 天门冬 氨酸 多肽 dna 分子 方法 | ||
1.一种用于克隆含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的DNA分子，其特征在于，其编码链的序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种克隆来自于野蚕丝素蛋白的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因重复序列的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：合成编码链序列如SEQ ID NO：1所示的DNA分子；所述DNA分子的编码链序列的5’端含有BglII的粘末端碱基，3’端具有BamHI的粘末端碱基，所述BglII位点的上游还具有AgeI的粘末端碱基；
步骤2：取所述DNA分子与pSLFA1180FA质粒连接获得转化质粒，转化感受态细胞，筛选阳性克隆、提取质粒、BglII/BamHI双酶切、收集小片段即得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述连接具体为取限制性核酸内切酶AgeI和BamHI消化pSLFA1180FA质粒，收集大片段，与编码链序列如SEQ ID NO：1所示的DNA分子经T4连接酶连接。
4.一种克隆单倍的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因序列的方法，其特征在于，取限制性核酸内切酶AgeI和BamHI消化pSLFA1180FA质粒收集大片段，与编码链序列如SEQ ID NO：1所示的DNA分子经T4连接酶连接，获得单倍的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因克隆；转化感受态细胞，筛选阳性克隆、提取质粒、BglII/BamHI双酶切、收集小片段即得。
5.一种克隆双倍的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因序列的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：取限制性核酸内切酶AgeI和BamHI消化pSLFA1180FA质粒，收集大片段P1，与编码链序列如SEQ ID NO：1所示的DNA分子经T4连接酶连接，获得单倍的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因克隆pSL-AYR1；
步骤2：取限制性核酸内切酶BglII/EcoRI消化所述单倍克隆pSL-AYR1，收集小片段P2；取限制性核酸内切酶BamHI/EcoRI消化所述单倍克隆pSL-AYR1，收集大片段P3；取所述小片段P2与所述大片段P3经T4连接酶连接，获得双倍的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因克隆pSL-AYR2；
步骤3：转化感受态细胞，筛选阳性克隆、提取质粒、BglII/BamHI双酶切、收集小片段即得。
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