[发明专利]高效液相色谱法测定组合物中巯基化合物含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及组合物中巯基化合物含量的检测方法，以及甲酸的新用途，更具体的，涉及甲酸作为稳定剂，在使用高效液相色谱分析法测定组合物巯基化合物的含量及稳定其有关物质的应用。

背景技术

巯基化合物中以二巯基类的有机化合物的实际应用较多见，它重要的代表是二巯丁二酸(DMSA)及其钠盐（Na-DMSA）、二巯丙磺酸及其钠盐（Na-DMPS）等，其主要的应用之一是作为金属、类金属解毒药,用于治疗锑、汞、砷、铅、铜等急、慢性中毒及肝豆状核变性(铜代谢障碍)。

随着现代工业、交通、电子产业的迅速发展以及对重金属的大量开采和应用，自然界中空气、土壤、水源及食物中的生物链受到重金属的污染日愈严重，人们对重金属，尤其是铅的接触和吸收在逐渐增加。目前我国儿童铅中毒的发生率为30%～50%。铅中毒普遍性和严重性,目前已成为严重危害我国儿童健康的重大隐患之一，严重影响到儿童的发育和健康成长。

目前，临床上最有代表性的重金属解毒剂就是二巯丙磺酸钠（Na-DMPS）、二巯丁二酸钠(Na-DMS)、二巯丙醇（BAL）、二巯丁二酸（DMSA）等。其中二巯丁二酸因其口服有效，疗效确切，毒性低，使用方便，已被国内外作为首选的重金属解毒剂，用于解救铅、汞、砷、镍、铜等金属中毒。国内临床上解毒剂使用较多的剂型是注射液，例如二巯丙醇注射液、二巯丁二钠注射液，而口服的目前只有二巯丁二酸成人胶囊，品种极少，尚未见适合儿童口服的专用剂型，所以开发此类药品具有现实而迫切的意义。

与此同时，目前该类药品在对应的质量控制标准领域也缺乏简便易行的方法，这可能与产品本身因含有巯基而导致不稳定等因素有关。对临床口服应用最广泛的二巯丁二酸而言，现行除《中国药典》2000版和2010版有提出质量标准外，各国药典包括USP（31版）、BP（2008年）以及JP（15改正版）均未收载该品种，而且《中国药典》上收载的质控标准都过于简单，含量测定采用沉淀滴定法，因其降解的有关物质很不稳定而使质控标准的制定难度加大。

因为二巯类化合物分子结构中含有活泼的巯基官能团，尤其在含水的溶液中不稳定，其中一种不稳定现象之一包括巯基官能团分子内或分子间互相缩合形成双硫键，例如申请人经质谱分析确定，二巯丁二酸在水中部分降解成双硫化物（R-S-S-R）这种有关物质。而在采用反相高效液相色谱法分析该类化合物的含量和有关物质时，样品供试液和流动相中必然含有水，这样就无法避开产品的不稳定和有关物质增多的问题。显然，在采用高效液相色谱分析过程中，如果因为流动相含水的问题以及样品分析的前处理、测试过程中导致了二巯化合物含量的降低和有关物质的增大，那么很容易给二巯类解毒药品例如胶囊、片剂等固体制剂产品本身固有的稳定性造成误会，因为固体产品的含量偏低或有关物质的增大都可能是分析测试过程中造成的，进而无法体现产品本来固有的准确含量，造成测试数据的偏差。

以二巯丁二酸为例，现有的分析方法包括沉淀滴定法、高效液相色谱法（HPLC）、高效液相色谱荧光法(HPLC-FR)、高效液相色谱-质谱联用法（LC-MS）等。

其中的沉淀滴定法，是中国药典采用的方法，不但误差大，对降解的杂质的测定也无能为力。荧光衍生化法：是基于HPLC的方法，但是对样品的荧光化处理程序繁琐，还需要配备专门的荧光检测器。液质联用法：操作成本高，也不便捷，不能普适于一般性药厂对产品的质控要求。

一些文献中也尽管采用单独的HPLC法，但是经申请人试验发现，对样品测试的稳定性难以达到满意的水平，在含水的流动相中巯基化合物容易部分降解，特别是随着测定时间的延长，巯基化合物不断的降解，容易导致测得的含量比实际的含量偏低。

发明内容

本发明的目的是公开一种高效液相色谱法测定组合物中巯基化合物含量的方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。

本发明还涉及甲酸的新用途，在使用高效液相色谱分析法测定组合物中巯基化合物的含量时作为稳定剂的应用。

本发明所述的高效液相色谱法测定组合物中巯基化合物含量的方法，其特征在于，流动相为含有甲酸的水相与有机相的混合物，色谱柱为反相色谱柱，检测器为紫外检测器；

所述有机相为甲醇或乙腈；

所述水相是磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、离子对试液或纯水；

有机相∶水相∶甲酸＝50～500∶949～460∶1～40，体积比；

以样品供试液的体积计，样品供试液中，甲酸体积百分比为0.5～10.0%；

样品供试液的存储环境优选为0～8℃的低温存储；