[发明专利]佐剂配制的包含细胞因子诱导剂的流感疫苗

说明书

本申请是2006.11.06提交的CN200680047600.7，题为“佐剂配制的包含细胞因子诱导剂的流感疫苗”的分案申请。

本文引用的所有文件全文纳入本文作为参考。

技术领域

本发明属于用佐剂配制疫苗来提供保护以抵御流感病毒感染的领域。

背景技术

目前常规使用的流感疫苗一般不含佐剂。参考文献1的第17和18章详细描述了这些疫苗。它们基于活病毒或灭活的病毒，灭活疫苗可以基于完整的病毒、“裂解(split)”病毒或纯化的表面抗原(包括血凝素和神经氨酸酶)。血凝素(HA)是灭活流感疫苗中的主要免疫原，参考HA水平标准化疫苗剂量，疫苗通常含有约15μgHA/毒株。

流感爆发期需要大量流感疫苗，但难以增加疫苗供应从而满足如此巨大的需求。因此，除了生产更多疫苗抗原，有人提出可以使用较低含量的抗原/毒株，同时使用佐剂来弥补减少的抗原剂量。还有人提出在流行间期采用相同的方案，从而例如能覆盖更多人群而无需提高生产水平。

有人提出可将铝盐佐剂用于流感疫苗(例如，见参考文献2-5)。利用MF59水包油乳液也已见报道[6]，希龙疫苗公司(Chiron Vaccines)的商品化FLUAD^TM产品中也用了该乳液。

本发明的目的是提供佐剂配制的其它改进流感疫苗(对于流行期和流行间期使用)和它们的制备方法。

发明内容

现已发现虽然水包油乳液是流感疫苗的优良佐剂，但仍可通过额外加入一种或多种其它免疫刺激剂来提高它们的效率。所述其它试剂不仅增加血凝滴度或抗-血凝素ELISA滴度(二者衡量免疫应答的数量)，其还起到提高应答质量的作用。具体地说，现已发现所述其它试剂能改善流感疫苗引发的细胞因子应答，例如干扰素-γ应答，改善水平远胜于只使用佐剂或该试剂时所见的。已知细胞因子应答涉及宿主抵御流感(病毒)感染的防御早期和决定阶段[7]。

因此，本发明提供包含(i)流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐剂；和(iii)细胞因子诱导剂的免疫原性组合物。

本发明还提供制备免疫原性组合物的方法，所述方法包括混合：(i)流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐剂；和(iii)细胞因子诱导剂的步骤。

本发明提供装有以下组分的试剂盒：(i)包含流感病毒抗原的第一试剂盒组分；和(ii)包含水包油乳液佐剂的第二试剂盒组分，其中(a)所述第一组分和所述第二组分包含细胞因子诱导剂，或(b)所述试剂盒装有包含细胞因子诱导剂的第三试剂盒组分。

水包油乳液佐剂

已发现水包油乳液特别适用于佐剂配制的流感病毒疫苗中。已知各种这样的乳液，它们通常包含至少一种油和至少一种表面活性剂，其中一种或多种油和一种或多种表面活性剂是生物可降解(可代谢)和生物相容的。乳液中的油滴通常直径低于5μm，甚至可具有亚微米直径，用微流化仪可实现这些小尺寸，从而能提供稳定的乳液。优选尺寸小于220nm的油滴，因为能对它们进行过滤灭菌。

本发明可使用诸如动物来源(例如鱼)或植物来源的油。植物油来源包括坚果、种子和谷物。坚果油的例子是最常购得的花生油、大豆油、椰油和橄榄油。例如，可利用从霍霍巴豆(jojoba bean)获得的霍霍巴油。种子油包括红花油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油等。在谷物油中，玉米油是最易购得的，但其它谷物如小麦、燕麦、黑麦、大米、画眉草(teff)、黑小麦等的油也可利用。通过水解、分离和酯化合适的坚果和种子油起始物质可制备种子油中天然不存在的甘油和1,2-丙二醇的6-10碳脂肪酸酯。哺乳动物乳汁的脂肪和油类是可代谢的，因此可用于实施本发明。本领域熟知从动物来源获得纯油所需的分离、纯化、皂化和其它方法。大多数鱼含有不难回收的可代谢油。例如，本发明可用的几种鱼油的例子是鳕鱼肝油、鲨鱼肝油和鲸油，如鲸蜡。可以5-碳异戊二烯单位通过生物化学方法合成许多支链油，这些支链油通常称为类萜。鲨鱼肝油含有称为角鲨烯(2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四己烯(tetracosahexaene))的支链不饱和类萜，这是本发明特别优选的。角鲨烷是角鲨烯的饱和类似物，其也是优选的油。包含角鲨烯和角鲨烷的鱼油不难从商业来源购得，或可通过本领域已知的方法获得。其它优选的油是生育酚(参见下文)。可利用油的混合物。