[发明专利]一种均相免疫分析方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米技术和生物分析技术领域，具体涉及一种均相免疫分析方法。

背景技术

免疫分析是目前最常用的生物分析技术，它们在临床诊断，食品和公共安全检测中发挥十分重要的作用。目前免疫分析几乎均采用微孔板为分析平台的非均相免疫反应模式。这种方法存在某些严重的缺陷例如需要抗体包埋，缓慢的异相免疫反应，多次冲洗和酶放大反应等步骤后才能进行离线检测分析。因此，这种方法操作复杂，耗费很长的分析时间，不能满足某些快速检测和诊断的要求。另外该模式需要样品和试剂的量较大，一般反应体积为50微升以上，检测成本较高，不适用于大规模人群的普查和筛选。更重要的是目前免疫分析大都采用荧光、吸光度和化学发光等检测方法，这些方法存在固有缺陷，会影响分析的灵敏度和选择性。在荧光检测中，生物样品的自荧光以及标记荧光探针光漂白会影响分析结果的灵敏度和可靠性。吸光度法和化学发光检测是基于酶放大技术，选择性和灵敏度不够理想，常常会产生假阳性结果。总体来说，现行免疫分析方法灵敏度和选择性不够高，很难用于某些疾病（如恶性肿瘤）的早期诊断。

液相法（或称为均相法）的免疫反应和信号测定在溶液中一步完成，没有固相的参与，因此反应速度较快，操作也相对简单，其中均相荧光免疫测定应用最为广泛。目前均相荧光免疫分析是基于荧光共振能量转移原理构建的。

但是荧光共振能量转移分析系统结构复杂，仪器价格昂贵。另外，生物体内自身荧光会增加背景的干扰，其应用也受到一定的限制。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种均相免疫分析新方法。

本发明均相免疫分析方法的原理为：首先将纳米贵金属分别标记在两种抗体（或一种抗体和抗原）上，当纳米贵金属标抗体和/或抗原加入到含有待测抗原的溶液中，将会发生夹心免疫反应或竞争免疫反应，生成的二聚或多聚免疫复合物的半径大于游离的纳米贵金属标抗体，夹心免疫反应中，待测抗原浓度越高，含纳米贵金属的粒子的平均粒径将变得越大；竞争免疫反应中，待测抗原浓度越低，含纳米贵金属的粒子的平均粒径将变得越大，因此可根据表征含纳米贵金属的粒子的粒径的表征参数与待测抗原或抗体浓度之间的关系建立定量分析方法。

为了灵敏地检测含贵金属纳米粒子的复合物的平均粒径变化，本发明还进一步将散射相关光谱与贵金属纳米粒子的标记技术结合，采用散射相关光谱灵敏地测定贵金属纳米粒子的粒径变化。散射相关光谱是一种单颗粒分析方法，它的原理是基于在高聚焦的激光束下，单个贵金属纳米粒子由于布朗运动，产生散射信号的涨落，通过相关分析可获得激光照射区内粒子的特征扩散时间（或水合动力学半径）和粒子的数目等的特征参数。在免疫分析中，一般采用粒子的特征扩散时间为特征参数。

基于上述原理，本发明提供了一种均相免疫分析新方法，选自以下任一：

方法一：

包括下列步骤：采用均相夹心免疫分析法，将含有待测物的样本与两种被纳米贵金属标记的抗体，在均相的免疫反应体系中进行夹心免疫反应，通过散射相关光谱技术获得表征反应液中含纳米贵金属的粒子的粒径大小的表征参数，根据该表征参数与待测物浓度之间的关系，获知样本中待测物的浓度；

方法二：

包括下列步骤：采用均相竞争免疫分析法，将含有待测物的样本与被纳米贵金属标记的抗体和被纳米贵金属标记的抗原或半抗原在均相的免疫反应体系中进行竞争免疫反应，通过散射相关光谱技术获得表征反应液中含纳米贵金属的粒子大小的表征参数，根据该表征参数与待测物浓度之间的关系，获知样本中待测物的浓度。

本发明的方法，可用于对待测物的定性或定量分析。

所述待测物为抗原或半抗原。

所述样本可为各种常规液体样本，如血清、体液、排泄物、分泌物等液体采样的原样本或经常规稀释的样本，或者如毛发、指甲等固定样本经常规溶解或提取处理后的液体样本。

所述纳米贵金属可选自纳米金，纳米银和纳米铂。纳米贵金属可市购或自行制备。

纳米贵金属的粒径优选10纳米至100纳米。

较佳的，纳米贵金属标记抗体或抗原的摩尔比为1:1到1:50。