[发明专利]一种以高速逆流色谱技术纯化制备茶多糖复合物的方法

权利要求书

1.以茶叶为原料，粉碎机粉碎后，加入质量体积比（W/V,千克/升）为1:（5-30）的水，于40-95℃处理0.5-12小时，然后用纱布过滤，得滤液，滤液离心后，经旋转蒸发浓缩，浓缩液加入4倍体积95%乙醇，静置2-12小时，获得乙醇沉淀物，将沉淀物冷冻干燥，得茶叶粗多糖；茶叶为绿茶、白茶、黄茶、乌龙茶（青茶）、红茶、黑茶中的任一种。

2.配制高速逆流色谱所需的双水相体系：将聚乙二醇溶解于水，使其质量百分比浓度为4-32%，作为高速逆流色谱的固定相。

3.如权利要求2所述的聚乙二醇水溶液，其特征在于所使用的聚乙二醇为聚乙二醇200、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇800、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的1种或2种。

4.如权利要求3所述的使用2种聚乙二醇者，其特征在于2种聚乙二醇的质量比为1:1。

5.配制质量百分比浓度5-35%的KH₂PO₄-K₂HPO₄缓冲溶液，并使其pH达到4.0-9.0，作为高速逆流色谱的流动相。

6.高速逆流色谱分离纯化茶多糖复合物，其特征在于用步骤（2）中所述的固定相配制茶叶粗多糖溶液，用恒流泵将固定相充满高速逆流色谱分离柱，再以0.5-10.0ml/min的流速注入茶叶粗多糖溶液，然后开启高速逆流色谱仪分离柱的转速至200-1000rpm，并以0.2-20.0 ml/min的流速泵入步骤（2）所配制的流动相，进行分离纯化，用自动分步收集器收集高速逆流色谱仪出液管的分离液，采用蒽酮-硫酸法或苯酚-硫酸法检测收集管的糖含量浓度，以糖含量浓度为纵坐标，收集管号为横坐标，制作洗脱曲线，将洗脱曲线的每一个洗脱峰所对应收集管的收集液分别合并，获得合并收集液；根据洗脱峰的个数，获得相应个数的合并收集液。

7.权利要求6所述的的合并收集液，分别经截留分子量为2000-10000道尔顿的透析袋流水透析5-72小时，透析后的各合并收集液分别经膜孔径截留分子量为2000-20000道尔顿的超滤膜浓缩，超滤浓缩液经真空冷冻干燥或喷雾干燥获得茶多糖复合物的高速逆流色谱纯化组分。