[发明专利]一种蟆叶秋海棠叶片离体再生体系建立的方法

权利要求书

1.一种蟆叶秋海棠叶片离体再生体系建立的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)外植体的选取与消毒：选取3个月左右叶龄的叶片作为外植体，冲洗干净后，进行消毒，消毒过程为：先以适量洗衣粉溶液浸泡清洗，后用自来水反复冲洗，放入质量份数为3％的H₂O₂中浸泡3min，取出后立即转入含有2％(质量浓度)吐温-80的0.1％升汞溶液中消毒3min，再以无菌水冲洗5-6次，每次6-8min，消毒滤纸吸干表面水分，将叶片边缘切除后切成0.5-1cm²的方形小块。

(2)不定芽的诱导：取步骤(1)中处理得到的外植体方形小块，将叶片以远轴面接种于诱导培养基中进行不定芽的诱导，培养温度为25±2℃，首先在黑暗中培养24h，然后进行正常光照培养15d；所述正常光照培养条件为：光照时间为14h/d，光照强度为1300lx；所述诱导培养基为MS+0.8mg/L6-BA+0.3mg/L IBA+0.5mg/L GA₃，pH值为6.0；

(3)高压静电场HVEF处理：强度为5KV/cm，时间1小时；

(4)不定芽的继代增殖：将诱导得到的不定芽切割后，接入继代增殖培养基中进行继代培养20d，培养温度为25±2℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600lx；所述继代增殖培养基为MS+1.2mg/L6-BA+0.2mg/L IBA+0.2mg/LKT，pH值为6.0；

(5)根的诱导：将步骤(4)中继代增殖得到的蟆叶秋海棠试管苗接入生根培养基中进行生根培养15d，培养温度为25±2℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600lx；所述生根培养基为1/2MS+0.2mg/L IBA+0.1mg/LNAA，pH值为6.0；待不定跟数5条左右，植株整体生长稳健时，可准备移苗出瓶。

(6)将培养瓶的瓶盖打开，炼苗2-3天，移栽入扦插基质中，所述扦插优选为：按照3∶2∶1∶1的重量比例将马肝土、黄土、泥炭土和珍珠岩混匀，地上部分喷洒0.1％的多菌灵，每天喷水2次，保证湿度，避免阳光直射。

2.通过权利要求1所述方法制备的蟆叶秋海棠种苗。