[发明专利]一种基于微流控芯片的病原体检测方法

权利要求书

1.一种基于微流控芯片的病原体检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1） 集成微磁场的微流控芯片的制作：用软刻蚀的方法制得微流控芯片的阳模；将两个导磁棒固定于阳模微通道的两侧，导磁棒之间的夹角是0～180^o，导磁棒所形成的平面与微芯片的平面之间的夹角是90^o；采用原位反应成型法，将液态预聚物倒在固定导磁棒的阳模上，反应固化后，脱模成型，打进样孔和出样孔，然后与盖片键合，即得到集成微磁场的微流控芯片；

（2） 修饰有抗特定病原体表面蛋白单抗的磁球制备：用乙基-[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺混合物活化磁球表面的羧基，然后加入抗待测病原体表面蛋白的单抗，后将连有抗体的磁球分散在含有叠氮化钠、BSA的PBS缓冲液中，保存备用；

（3） 生物素化的抗病原体表面蛋白单抗的制备：采用生物素化的试剂盒在HA单抗上修饰生物素，用脱盐柱进行纯化；

（4） 在芯片上进行磁性夹心免疫荧光反应检测病原体：首先用BSA溶液封闭芯片通道，同时在芯片的导磁棒上各放一块永磁铁，然后依次向通道中注入修饰有抗特定病原体表面蛋白单抗的磁球、特定病原体、生物素化的抗该病原体表面蛋白单抗、链酶亲和素修饰的量子点，每步反应后都用PBS缓冲液冲洗通道，洗掉未反应的药品，最后通过荧光显微镜与光纤光谱仪进行荧光检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备微流控芯片的材料为聚二甲基硅氧烷或聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，制作微流控芯片用的阳模为金属基阳模、单晶硅阳模或玻璃阳模。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，制作导磁埲材料为氧化铁或硅钢类软磁性材料。