[发明专利]检测转基因作物的微流体蛋白质芯片及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及转基因成分检测和微流体蛋白质芯片的技术领域，具体涉及一种用于检测多种转基因成分的高通量微流体蛋白质芯片和相关试剂盒。

背景技术

近十年来，转基因技术得到广泛发展。研究人员利用转基因技术培育出了抗除草剂、抗干旱、耐盐碱、抗重金属和抗病虫害、营养价值高的品种，对提高粮食产量、减少收获后损失以及增加农产品营养价值具有重要作用。随着人们对转基因的不断研究、吸收、推广，转基因作物的多样性越趋丰富。多个国家和地区相继批准了转基因作物进入商业化生产，同时转基因作物的种植面积也大幅增加。转基因作物的发展为社会带来了巨大的经济效益。

然而，转基因技术同时也对人类的生活带来了一些潜在的威胁，如某些基因导入宿主之后会使食品产生毒性，转基因食物产生过敏原，使人产生抗药性，食品的营养价值发生改变等。人们对转基因的态度褒贬不一。因此，在进行转基因食品研究开发和商业化的同时，为了对转基因食品的安全性给予综合评估，使消费者能够快速区分转基因食品与天然食品，建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测， 能够促进农业转基因生物安全管理，保障人和动物以及微生物的安全，同时能够保护生态环境，促进农业转基因生物技术的进一步研究。为了保护消费者自由选择食品的权益，全球有40多个国家设定了转基因含量的上限，在欧盟，其标准为0.9%，韩国为3%，德国为0.5%，日本为5%。

转入基因表达蛋白质是转基因监测的重要对象，其不但作为转基因测定的主要标志物，而且能够反映转基因物种的功能特性，因此对转基因蛋白的检测对转基因安全控制具有重要的意义。转基因蛋白质检测目前常用的方法是酶联免疫吸附法（ELISA）, 但是这种方法具有低通量的局限性，不能对多种蛋白进行同时检测。随着转基因技术的发展及技术应用的扩散，含多种转基因成分的品种逐渐增多，并且在转基因产品的流通过程中逐渐出现“未知”样本，即来源于田间污染或违规种植。例如我国多省市场上发现了未允许商业化的转基因作物产品，在我国出口欧洲的产品中也被检出了转基因成分。不能被及时检测和发现的未知转基因产品的存在极大地损害了贸易信誉，并对人们的健康安全带来威胁。因此，对转基因蛋白的高通量检测方法，即实现在同一次试验中检出并判断所有“潜伏”的转基因蛋白成分，对中国的农作物贸易和人类的健康安全具有重要的意义。

微流体蛋白质芯片是一项国内外先进的生物芯片技术，其采用特殊的流体构造，使生物芯片中的反应能够在液态环境中进行。微流体芯片系统一般包括泵、封闭的反应腔、流路等，负责微量流体的传感、输送、检测和控制，并结合扫描仪等成像系统对反应结果进行定量、全面的分析。微流体式相较点样式芯片具有众多的优点，如具有稳定、不易污染、检测样品用量小、微型、自动化等特性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测转基因作物的微流体蛋白质芯片及其试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种高通量检测转基因蛋白的微流体蛋白质芯片，包括基于μParaflo^TM微流体生物芯片合成的含六种核酸序列的核酸芯片以及6种抗体-寡核苷酸复合物探针，从而实现对转苏云金芽泡杆菌Bt杀虫晶体蛋白（Cry1Ac）、转苏云金芽泡杆菌Bt杀虫晶体蛋白（Cry1c）、转苏云金芽泡杆菌Bt杀虫晶体蛋白（Cry1F）、转苏云金芽泡杆菌Bt杀虫晶体蛋白（Cry1Ab）、大豆胰蛋白酶（SBTI）和新霉素磷酸基转移酶Ⅱ基因（NPTⅡ）这6种转基因蛋白的同时检测。

作为本发明的高通量检测转基因蛋白的微流体蛋白质芯片的改进：

六种核酸序列为：

A：3' CAC ACG CCT TTA CGA AGA CGA T 5'

B：3' CAG GTC AAA AGG GTC CTT AGG GA 5'

C：3' TAG TGT GTT TCC GTT GAA AAC A 5'

D：3' TAG TTG TCT GTA ATT AAC CCG CG 5'

E：3' AAA CCG TTA CCA TCT TGA GTG TGG C 5'

F：3' TTA ACG TGC CAT AGG TAG ACA T 5'  ；

6种抗体-寡核苷酸复合物探针中的核酸序列和相应的检测抗体为：

a：  5' GTG TGC GGA AAT GCT TCT GCT A 3'，抗Cry1Ac兔单抗；