[发明专利]一种戊糖片球菌高密度发酵培养基及发酵方法

权利要求书

1.一种戊糖片球菌高密度发酵培养基，其原料配方如下： 

蛋白胨1~20 g，

酵母粉1~10 g，

柠檬酸钠0.5~5 g，

葡萄糖10~50 g，

乙酸钠1~6 g，

磷酸氢二钾1~6 g，

硫酸镁0.1~2 g，

玉米浆2~30 g，     用蒸馏水定容至1000mL。

2.一种权利要求1所述的戊糖片球菌高密度发酵培养基的制备方法，其步骤如下：

（1）、将蛋白胨1~20 g、酵母粉1~10 g、柠檬酸钠0.5~5 g、乙酸钠1~6 g、磷酸氢二钾1~6 g、硫酸镁0.1~2 g、玉米浆2~30 g混合，用蒸馏水将固体全部溶解并定容至900mL，用5~8mol/L的NaOH和5~8mol/L盐酸调整pH到6.2~6.8，在103.4kPa压力、115~121℃温度下灭菌20~30 min得培养基；

（2）、称取葡萄糖10~50 g，加蒸馏水溶解并定容至100mL，在103.4kPa蒸汽压力、115~121℃温度下灭菌20~30 min，得葡萄糖溶液；

（3）、将步骤（2）得到的葡萄糖溶液加入到灭过菌的步骤（1）的培养基中，得到戊糖片球菌高密度发酵培养基。

3.一种利用权利要求1所述的戊糖片球菌高密度发酵培养基对戊糖片球菌进行高密度发酵的方法，其步骤如下：

（1）、将斜面保存的戊糖片球菌用接种环取一环，接入装有30~50mL MRS培养基的三角瓶中，在28~40℃条件下，150~200 rpm下震荡培养，当菌体OD₆₀₀达到2.0~3.0时即得发酵种子液；

（2）、称取葡萄糖35~ 40 g，加蒸馏水溶解并定容至100 mL，在103.4kPa蒸汽压力、110~ 115℃温度下灭菌20~ 30 min得补料用葡萄糖溶液；

（3）、将发酵种子液按0.5%~5%的接种量接种于权利要求1所述的戊糖片球菌高密度发酵培养基中，发酵罐装液量50%~80%，控制罐温28~40℃，转速120~300 rpm，通风比0.1~ 1.0 VVM，在此发酵条件下培养4~10 h后，通过滴加5~8mol/L NaOH溶液使发酵液pH保持在5.0～6.5范围内，直至发酵结束；当发酵至4~10 h时开始补料，之后每隔2 h进行一次补料，共补料3次，补料完成后继续发酵至20~25 h结束发酵；

所述补料的成分为步骤（2）制得的补料用葡萄糖溶液，每次加入量为6~12g/L，使发酵体系中葡萄糖浓度为10~25 g/L，发酵结束后葡萄糖终浓度为0.5~3 g/L。