[发明专利]鹅产蛋的融合催乳素蛋白主动免疫调控方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鹅产蛋的融合催乳素蛋白主动免疫调控方法。

背景技术

中国鹅多数为白羽中型鹅品种，素以体型大、早期生长发育快，抗病力强，耐粗饲、耗料少，肉质好等特点，尤其产绒量高，羽绒品质好而享誉国内外。中国鹅为季节性产蛋，但就巢性极强，导致其产蛋量低下。采用产蛋量高的品种作为母本开展杂交，从其综合生产性能表现来看不能满足当地生产和市场对产品的需要，而且还冲淡了地方鹅品种原有的优良品质，影响了养鹅的经济效益。因此消除就巢性是提高地方鹅种繁殖性能最有效的方式。

研究表明，家禽就巢性的发生是体内多种激素或因子共同作用的结果，这种作用发生在下丘脑-垂体-性腺轴的各个水平上。目前比较一致的观点是：禽类的就巢行为是由产蛋过程中卵巢产生的雌激素等作用于下丘脑，促进下丘脑分泌血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）等递质，促进垂体分泌催乳素（Prolactin, PRL）所致。在此过程中，PRL是促发就巢的最直接的激素。PRL是动物垂体前叶分泌的一种激素，禽类的就巢性与血浆PRL水平变化有关。血浆PRL浓度上升到一定的程度可引发就巢。就巢开始后，就巢行为本身又促进PRL的分泌，高PRL水平进而继续维持就巢行为；产蛋期火鸡注射PRL能使其迅速发生就巢行为；人为终止火鸡的就巢行为将导致血浆PRL水平急剧下降；对矮脚鸡促PRL释放因子——VIP的被动免疫可降低就巢发生率。说明PRL在血浆中的浓度变化是禽类就巢发生和维持的关键因素。因此，可通过外源注射PRL的主动免疫方法，以提高地方鹅种就巢期PRL的抗体水平，中断鹅的就巢行为，达到提高产蛋性能的目的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种鹅产蛋的融合催乳素蛋白主动免疫调控方法，降低鹅的就巢间隔，并提高其产蛋量。

本发明是通过以下技术方案来实现的。

一种鹅产蛋的融合催乳素蛋白主动免疫调控方法，步骤包括：

（1）通过RT-PCR，从鹅下丘脑和垂体组织总RNA抽提物中扩增出全长PRL靶序列，并插入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点；

（2）再插入PMD19-T载体，与pET32a双酶切并连接，转化DH5α；

（3）使用IPTG诱导3小时，以分泌型表达；

（4）诱导表达后的菌珠经高压超声破碎，离后上清溶液过Ni-亲和层析柱，纯化产物透析后冻干浓缩，得到融合催乳素表达蛋白，经蛋白定量后，将浓缩蛋白分别稀释至1~4mg/ml；

（5）将融合催乳素表达蛋白与佛氏完全佐剂以1:0.8~1.2的质量比混合；

（6）将混合物对鹅颈部皮下多点注射，注射剂量为1.5~2.5ml。

进一步地，上述步骤（3）中，调节诱导后所表达蛋白产物浓度在300~350mg/L。

进一步地，上述步骤（5）中，融合催乳素表达蛋白与佛氏完全佐剂以1:1的质量比混合。

进一步地，上述步骤（6）中，注射剂量为2ml。

进一步地，上述鹅选取皖西白鹅。

本发明的有益效果：

将重组表达的融合催乳素蛋白应用于鹅主动免疫，通过调控体内激素水平提高鹅的繁殖性能，不仅可解决常规选育难以剔除就巢性状的难题，同时，也可避免人为注射性激素类物质所导致的药物残留等问题。

具体实施方式

下面根据实施例对本发明作进一步详细说明。

一种鹅产蛋的融合催乳素蛋白主动免疫调控方法，步骤包括：

（1）通过RT-PCR，从鹅下丘脑和垂体组织总RNA抽提物中扩增出全长PRL靶序列，并插入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点；

（2）再插入PMD19-T载体，与pET32a双酶切并连接，转化DH5α；

（3）使用IPTG诱导3小时，以分泌型表达，调节诱导后所表达蛋白产物浓度在300~350mg/L；

（4）诱导表达后的菌珠经高压超声破碎，离后上清溶液过Ni-亲和层析柱，纯化产物透析后冻干浓缩，得到融合催乳素表达蛋白，经蛋白定量后，将浓缩蛋白分别稀释至1~4mg/ml；

（5）将融合催乳素表达蛋白与佛氏完全佐剂以1:0.8~1.2的质量比混合，优选1:1的质量比；

（6）将混合物对鹅颈部皮下多点注射，注射剂量为1.5~2.5ml，优选2ml。

在本实施案例中，鹅选取皖西白鹅作为实验对象。