[发明专利]甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒，包括均相发光96孔测定板，甲状腺过氧化物酶抗体标准品，链霉亲和素包被供体微球溶液和生物素标记甲状腺过氧化物酶抗原，其特征在于：该试剂盒还包括甲状腺过氧化物酶抗体包被的受体微球溶液。

2.根据权利要求1所述甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析试剂盒，其特征在于：甲状腺过氧化物酶抗体包被受体微球溶液是按照以下配比的原料制成的，

a.将欲标记的甲状腺过氧化物酶抗体装入透析袋中，置于0.1M pH 8.0 磷酸盐缓冲液透析，去除Tris、甘氨酸等含有氨基的成分，透析后的抗体溶液，用紫外分光光度计测定抗体含量，调整浓度至1-2毫克/毫升；

b.受体微球加入0.1M pH 8.0 磷酸盐缓冲盐水溶液，离心洗涤1-2次，每次16000×G 15分钟，吸干上清液, 将微球浓度调整至10-20毫克/毫升待用；

c.按受体微球:透析后甲状腺过氧化物酶抗体为1:10的质量比混合于0.1M pH 8.0 磷酸盐缓冲盐水溶液中，再依次加入体积百分比0.6-0.625%的10%吐温20溶液、4-5% 新鲜配制的400 mM 氰基硼氢化钠溶液，充分混匀置37℃温箱内反应48小时以上；

d.用800mM氢氧化钠溶液配制溶度为65毫克/毫升的羧甲氨基胺溶液，加体积百分比为4-5%的羧甲氨基胺溶液于标记后的离心管内，置37℃温箱内反应1小时；

e.将离心管置于离心机内，16000×G 离心15分钟；用移液管吸取上清溶液，再加入100mM Tris-HCl pH 8.0溶液，重新悬浮微球；重复离心，最终调整浓度至5-10微克/毫升备用；

f.用pH 8.0 0.1 M Tris-HCl 缓冲液将标记后受体微球稀释至20微克/毫升，制备受体微球溶液。

3.一种甲状腺过氧化物酶抗体均相发光免疫分析的检测方法，其是按以下步骤进行的，

a.将分别瓶装的甲状腺过氧化物酶抗体标准品、链霉亲和素包被供体微球溶液、生物素标记甲状腺过氧化物酶抗原和甲状腺过氧化物酶抗体包被的受体微球溶液取出，至室温平衡20分钟；并将均相发光96孔测定板根据需要做好标记；

b.测定板微孔内依次加入50微升待测样本或标准品、25微升生物素标记甲状腺过氧化物酶抗原、25微升甲状腺过氧化物酶抗体包被的受体微球溶液，混匀后置37℃温箱或水浴，温育30分钟；

c.各孔再加入150微升链霉亲和标记供体微球溶液，混匀后置37℃温箱或水浴，继续温育20分钟；

d.应用均相发光免疫分析仪测定各孔发光强度，激发波长采用680纳米，检测波长采用615纳米；

e.标准品测定结果采用四参数拟合方式绘制标准曲线或获得数学函数，通过标准曲线或数学函数计算未知样品甲状腺过氧化物酶抗体浓度。