[发明专利]3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺用于检测添加在面粉中的过氧化苯甲酰

说明书

技术领域

本发明属于食品添加剂检测领域，具体涉及过氧化苯甲酰的检测。

背景技术

过氧化苯甲酰（C₁₄H₁₀O₄，以下用BPO表示）是面粉生产加工领域常用的一种增白添加剂，过量的过氧化苯甲酰能造成食品中β-胡萝卜素、维生素A、维生素B、维生素E等营养成分的大量破坏，而且食用含有过量过氧化苯甲酰水解生成的苯甲酸的小麦粉对肝脏非常有害，且容易引发多种疾病，出现牙龈出血、皮肤紫斑等症状，因此各国都规定了其限量标准。我国在1997年修订的《食品添加剂食用卫生标准》中规定过氧化苯甲酰的最大使用量为60 mg/kg，卫生部于2011年起要求全面禁止在面粉中添加过氧化苯甲酰。

目前用于过氧化苯甲酰的检测技术有色谱法和分光光度法两种。色谱法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法。这些方法需要先将BPO还原为苯甲酸，再依靠庞大或昂贵的精密仪器来完成。分光光度法包括碘量法、铁粉还原法、盐酸羟胺还原法，这些方法的样品前处理步骤繁琐，操作时间过长且需要熟练的实验技术人员。还有报道采用N,N,N',N'-四甲基对苯二胺、N-乙基-2-萘胺和N,N-二甲基对苯二胺等不同类型的显色剂使BPO转化为有色物质，这些显色反应不仅要用恒温水浴对反应体系进行加热，而且需要使用催化剂。此外，由于苯胺类物质具有强的致癌致畸性，限制了这些方法的应用。上述测定BPO的方法在实际应用特别是常规分析中具有一定的局限性。因此，寻找新的灵敏度高、选择性好并在此基础上建立操作简便、灵敏可靠、能满足BPO例行分析要求、绿色的新方法十分必要。

3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, 以下用TMB表示)是一种新型安全的还原试剂，已逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物，应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测领域，迄今为止，该试剂在食品加工领域的应用尚未见报导。

发明内容

本发明的目的是提供一种3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺的新用途。

3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺的用途，用于定性检测或定量检测添加在面粉中的过氧化苯甲酰。

进一步，所述定性检测是向面粉中滴加3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液，混合均匀，由面粉颜色的变化判断面粉中过氧化苯甲酰的含量是否超过4.0 mg/kg：

（1）面粉颜色变为蓝色表示面粉中过氧化苯甲酰的含量超过4.0 mg/kg；

（2）面粉颜色无变化表示面粉中不含有过氧化苯甲酰或者过氧化苯甲酰含量低于4. 0 mg/kg。

进一步，所述定量检测是依如下步骤进行：

（1）将面粉用丙酮洗涤、离心处理2～3次，合并离心所得的上层清液；

（2）步骤（1）所得清液用氮气吹干，得到白色固体；

（3）向白色固体中加入3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺乙醇溶液，再加入pH= 4.0的磷酸二氢钠缓冲溶液，定容，于652 nm处测定溶液的吸光度；

（4）用过氧化苯甲酰标准品替代步骤（3）的白色固体，绘制浓度-吸光度标准曲线；

（5）由步骤（3）的吸光度和步骤（4）的浓度-吸光度标准曲线即可计算出面粉中过氧化苯甲酰的含量。

过氧化苯甲酰含量的计算：                                                

其中，W为面粉中过氧化苯甲酰的含量（mg/kg）；C为步骤（3）溶液中过氧化苯甲酰的浓度（mg/L）；V为步骤（3）溶液的定容体积（L）；m为所称取面粉的质量（kg）。

进一步，步骤（1）所述洗涤是用涡旋振荡器将面粉分散于丙酮中，再超声处理。

3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺与过氧化苯甲酰接触后迅速反应，生成的产物具有明显的蓝色，反应的灵敏度高，利用该反应的特点实现过氧化苯甲酰的检测，最低可检测出面粉中4.0 mg/kg的过氧化苯甲酰。可简单迅速的定性检测出过氧化苯甲酰；定量检测时，样品处理简单，无需经过复杂繁琐的步骤即可实现显色反应，节省了检测时间，检测结果稳定可靠，三次重复试验的相对标准偏差均小于3.55%，且3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺对人体无毒害，对环境无危害。

附图说明

图1为3, 3', 5, 5'-四甲基联苯胺对不同浓度的过氧化苯甲酰显色反应。