[发明专利]一种微生物产γ-谷氨基甲酰胺合成酶催化合成L-茶氨酸的方法

权利要求书

1.一种产γ-谷氨基甲酰胺合成酶的菌株，该菌株为近玫色锁掷孢酵母（Sporidiobolus pararoseus）T-C2，已于2012年6月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2012232。

2.权利要求1所述的菌株在制备γ-谷氨基甲酰胺合成酶中的应用。

3.一种发酵法制备γ-谷氨基甲酰胺合成酶发酵液的方法，其特征在于：发酵所用菌株为权利要求1所述的菌株，发酵所用培养基为富集培养基，发酵条件为：接种量为5-10%，温度为28-30℃，转速为120-180r/min，振荡培养2-4天。

4.如权利要求3所述的发酵法制备γ-谷氨基甲酰胺合成酶发酵液的方法，其特征在于：所述富集培养基的组成为：0.25%甲胺盐酸盐、0.25 %甲醇、0.2 % NaCl、0.1 % KCl、0.03 % MgSO₄·7H₂O、0.005 % KH₂PO₄、0.005 % K₂HPO₄ 、1×10^﹣7 % VB₁₂及0.03 % 酵母粉，pH7.0-7.4。

5.如权利要求3或4所述方法得到的γ-谷氨基甲酰胺合成酶发酵液。

6.由权利要求5所述的发酵液制得的γ-谷氨基甲酰胺合成酶粗酶液。

7.如权利要求6所述的γ-谷氨基甲酰胺合成酶粗酶液，其特征在于：该粗酶液是将发酵液于4℃、12000 r/min离心15-20min，弃去上清，用10 mmol/L pH 6.0的磷酸盐缓冲液浸洗两次后，再于4℃、12000 r/min离心15-20min，弃去上清，然后将得到的细胞重悬于少量缓冲液中，缓冲液没住细胞即可，再于冰上用20 kHZ的超声波进行细胞破碎2-3min，即可。

8.利用权利要求6或7所述的γ-谷氨基甲酰胺合成酶粗酶液纯化得到γ-谷氨基甲酰胺合成酶的方法，其特征在于：该方法是将所述粗酶液调节pH值为8-9，在30℃条件下加入30-35%饱和度的硫酸铵进行盐析，用蛋白沉淀重溶液重溶至原始体积，再超滤脱盐后，采用SephadexG-75柱层析得到。

9.利用权利要求8所述的纯化的γ-谷氨基甲酰胺合成酶合成L-茶氨酸的方法，其特征在于：该方法是将上述纯化得到的γ-谷氨基甲酰胺合成酶按每升L-茶氨酸合成体系加0.01-0.02mLγ-谷氨基甲酰胺合成酶的比例加入到装有L-茶氨酸合成体系的试管中反应，在30-35℃、pH值为8-9的条件下反应10-12h后，将试管浸入沸水中终止反应，冷却至室温后，12000 r/min离心4-6min，取上清，得到L-茶氨酸。

10.如权利要求9所述的合成L-茶氨酸的方法，其特征在于：所述L-茶氨酸合成体系为：30 mmol/L 谷氨酸、150 mmol/L 乙胺盐酸盐、15 mmol/L ATP、30 mmol/L MgCl₂、pH7.75的100 mmol/L咪唑缓冲液、及0.1mg/mL CTAB。