[发明专利]黄柄鹅膏与共生植物室内共生关系的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种黄柄鹅膏与共生植物滇青冈室内共生关系的建立方法，属于生物技术领域，具体地说是属于植物组织培养及大型真菌菌丝体培养范畴。

背景技术

鹅膏菌属（Amanita）隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、鹅膏菌科（Amanitaceae），是有毒的大型真菌中较特殊、较有价值的一个世界性广布大属。鹅膏菌属中的大部份种属于著名剧毒菌，主要含鹅膏毒素，鹅膏毒素在研发抗菌抗病毒、抗肿瘤、镇静麻醉等新药方面具有潜在应用，因而成为了近年的研究热点。

鹅膏菌属绝大部分属于外生菌根真菌，目前尚不能进行人工栽培，难以开发利用，其子实体的生长发育与共生植物关系密切，因此鹅膏菌和其共生植物的生物学关系的研究，是进一步探讨鹅膏菌子实体发生机制的可行途径。

黄柄鹅膏菌(Amanita flavipes Imai) 是鹅膏属中的一个广布种，在云南武定狮子山分布较多，主要与壳斗科的滇青冈、元江栲（Castanopsis orthacantha）等阔叶树共生，滇青冈(Cyclobalanopsis glaucoides )为壳斗科(Fagaceae)、青冈属(Cyclobalanopsis Oerst.)植物，在狮子山阔叶林地上可以收集较多的滇青冈种子，因此本发明以滇青冈种子及黄柄鹅膏子实体为材料，成功地建立了黄柄鹅膏与滇青冈的室内共生关系，为今后共生机理及鹅膏子实体发生的机制研究等提供了技术贮备。

发明内容

本发明的目的在于，在室内或可控条件下建立一种简单稳定、互利互惠的黄柄鹅膏与滇青冈植物的共生关系。

实现本发明的技术方案：利用壳斗科滇青冈植物种子，成功得到了无菌苗及盆栽苗，利用黄柄鹅膏子实体诱导了菌丝体，将菌丝体分别接种到无菌苗及盆栽苗根部，室内建立了二者的共生关系，实现本发明的主要步骤如下：

（1）黄柄鹅膏菌丝体的诱导及培养：野外采摘生长优良、无虫害、未开伞或未完全开伞、菌柄较粗壮、菌盖较肥厚的成熟子实体；将子实体带回实验室，于超净台上用酒精棉球，轻擦菌盖表面及菌柄等部位，除去表面泥沙或土，将子实体从菌盖中部一分为四，用解剖刀取菌柄与菌盖交接处的内部组织块，切成约0.08～0.16cm²的小块；将以上切分的小组织块轻轻嵌入试管斜面诱导培养基（马铃薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、NH₄NO₃ 0.30～0.40g/L、谷氨酸 0.28～0.32 g/L、V_B1 0.10mg/L、麦芽汁 150 ml/L、琼脂11.00g/L，控制PH值为5.4左右）表面，培养温度为22～23℃，暗培养14～18天，菌块周围开始萌发出极少白色菌丝，53～60天，组织块多处隆起，表面长出团状、稠密的绒毛状白色菌丝；将以上诱导的菌丝转入培养皿中，用扩大培养基（马铃薯100.00～120.00g/L、葡萄糖9.00～12.00g/L、滇青冈腐叶干粉（过80～100目分样筛）30.00～50.00g/L、生境土干粉（过80～100目分样筛）60.00～80.00g/L、蛋白胨 3.00～5.00 g /L、NH₄NO₃ 0.60～0.80g/L、6-BA1.20～1.50mg/L、麦芽汁200～230 ml/L、琼脂6.00～8.00 g/L，控制PH值为5.4左右）进行扩大培养；