[发明专利]一种具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及大豆乳清多肽的制备，具体涉及生产豆类分离蛋白及豆制品产生的乳清废水的深加工，更具体地说是一种具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制备方法。

背景技术

大豆乳清蛋白存在于加工大豆分离蛋白和豆制品过程中排放的废水中，生产1吨的分离蛋白会排放20～30m³的乳清废水。初步估算，每加工1吨的分离蛋白所排放的乳清废水中含有乳清蛋白为70kg左右，因此，深入开发应用豆类乳清，对于豆类综合利用和环境保护方面都具有积极意义。近年来已有利用大豆分离蛋白加工抗肿瘤多肽和抗疲劳大豆多肽的报道，如刘娜等在中国实验诊断学上发表的论文《大豆寡肽抗疲劳作用的实验研究》，戚颖欣等在食品科学杂志上发表的《大豆多肽对小鼠急性肝损伤保护作用的研究》，所用原料均为分离蛋白或多肽。目前尚未见到利用大豆类乳清水解多肽开发保肝和抗氧化食品的报道。

已有的关于酶法水解乳清蛋白制备多肽的研究，如专利CN101519426A用碱性蛋白酶水解乳清蛋白，得到具有较高生理活性的多肽片段,分子量分布在100～2800Da之间；专利CN101785521A采用蛋白酶U和蛋白酶A复合水解得到乳清水解多肽，产物抗原性低、苦味小。这些酶法水解乳清多肽的特点是，①在水解前均对乳清蛋白进行热处理使其变性，加大能源耗费;②这些方法中酶都是一次性直接大量加入的，这样容易破坏水解时底物与酶的平衡关系，有相当一部分酶在加入后根本没有机会参与反应而在罐内慢慢降低酶活甚至失效（温度、pH值及时间会使酶活部分丧失）；况且一次性投入大量的酶会造成前期反应过快，过早产生大量游离氨基酸而使得多肽得率有所降低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制备方法。该方法酶解时间短、能耗较低，且使得1000Da以下小分子乳清多肽得率高，游离氨基酸含量较低。

本发明提供的一种具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制备方法，包括以下步骤：

1）、将大豆乳清水用常规方法进行絮凝沉淀，除去沉淀物，控制上清液的乳清蛋白的含量在4～5gL，每升上清液加入0.5g～1.5g半胱氨酸，在22-40℃保温静置6～12h；

2）、在pH2～3、温度40℃～55℃条件下，按每克乳清蛋白加入1000-2500活力单位（U）的酸性蛋白酶，分2～3次加入，每次加酶后水解1～2.5小时；

3）、在pH2～3、35℃～45℃条件下，按每克乳清蛋白加入1000-2500U的胃蛋白酶，分2～3次加入，每次加酶后水解1～2小时；

4）、灭酶、离心、过滤、浓缩、干燥，得到大豆乳清多肽。

所述的酸性蛋白酶可以是3.350酸性蛋白酶或537酸性蛋白酶，优选3.350酸性蛋白酶。

所述的大豆可以是黑豆、黄豆或青豆。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：

1.在本发明水解乳清蛋白之前，加入半胱氨酸处理，目的是用半胱氨酸改变乳清蛋分子内部的二硫键，使蛋白质容易被进一步水解；此外，利用半胱氨酸具有的还原能力和特殊的理化性质，当其与乳清蛋白结合后，会使乳清蛋白的结构和功能发生改变，从而增强抗肝损伤和抗氧化活性。试验发现，与传统的乳清蛋白热处理相比，半胱氨酸处理能有效提高酶解效率，多肽得率能提高8%～17%，同时也能降低耗能，符合绿色节能的宗旨。

2.先用酸性蛋白酶进行一次水解，然后用胃蛋白酶进行二次水解，这种复合酶水解，可以得到更多的小分子小黑豆乳清多肽。与用单酶水解和其他酶的复合水解相比，1000Da以下小肽所占比例达到80%以上，且游离氨基酸含量少，抗氧化功能更强。

3.先分批加入酸性蛋白酶，然后分批加入胃蛋白酶所得的多肽与一次性加入蛋白酶水解相比，游离氨基酸含量明显降低。

4.体外抗氧化实验表明，该多肽具有明显的清除羟自由基、超氧阴离子自由基和的作用，其总氧化性与Vc相近。动物喂养试验发现，该大豆乳清多肽不但具有保肝和预防化学性肝损伤的保健作用，而且还能起到延缓皮肤衰老、恢复皮肤弹性等美容效果。经人体试食发现，该大豆乳清多肽口感好，没有任何副作用。本发明制备的大豆乳清多肽既可以用于功能性食品和化妆品，也可以用于一般食品。

附图说明

图1小鼠肝组织切片H.E染色图，其中：A基础组，B模型组，C多肽组

具体实施方式

实施例1