[发明专利]一种隐睾特异性生精细胞模型的制备方法

权利要求书

1.一种隐睾特异性生精细胞模型的制备方法，包括下列步骤：

a)收集隐睾患者新鲜尿液，离心沉淀种子细胞；

b)细胞加入种子细胞培养液，培养；

c)iPS细胞的建立和鉴定；

d)iPS细胞体外诱导分化为生精细胞。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述种子细胞培养液为

A．Keratinocyte-SFM+supplement(BPE20ng/ml,EGF10ng/ml)+1%L-glutamine+1%P/S

B．330ml DMEM+110ml F-12nutrient mixure+50ml FBS+5mlL-glutamine+5ml P/S+0.4ug/ml Hydrocortisone+10ug/ml EGF上述A和B两种培养液，以体积比2:1混合即为最终培养液。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述iPS细胞的建立为通过将OCT4、SOX2、KLF4、CMYC4个转录因子导入种子细胞，接种在辐照后的饲养层细胞上，每天更换人胚胎干细胞培养液，将出现的集落样生长的细胞用机械法挑出克隆，所述人胚胎干细胞培养液为DMEM/F12+20%KSR+1%NEAA+1%L-谷氨酰胺+4ng/ml bFGF。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述iPS细胞体外诱导分化为生精细胞步骤为基础诱导液为DMEM/F12，加20%KSR，加1%NEAA，加1MmL-Glutamine，第一阶段诱导因子为BMP4，其作用浓度为100ng/ml，作用时间为1周；第二阶段诱导因子为FGF9，其作用浓度为50ng/ml，作用时间为2周；第三阶段诱导因子为RA，其作用浓度为1Um，作用时间为1周。