[发明专利]一种芍药胚培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植物的组织培养领域，具体涉及一种芍药胚培养方法。

背景技术

芍药（Peaonia lactiflora Pall.）为芍药科芍药属多年生宿根草本植物，是我国的传统名花，在中国已有3900多年的栽培历史。

播种繁殖，方法简单，种子随采随播，繁殖系数大，但芍药播种繁殖存在如下问题：1）由于经过几千年的人工栽培选育，芍药优良品种的雌蕊、雄蕊大部分瓣化，结实率低；2）芍药种子有上胚轴休眠现象，种子萌发对季节的依赖性强，繁殖周期长，播后发育良好的植株4-5年才可开花；3）芍药是异花授粉植物，播种繁殖无法保持母本的优良性状。目前，芍药常规繁殖方法以分株繁殖为主，3-5年分株一次，周期长，繁殖系数低，很难适应和满足产业化大生产和国内外市场的需求。

芍药组织培养可以解决育种中远缘杂交不能正常发育、种子休眠、种子生活力地下和自然不育、育种周期过长、品质改良等方面的问题，且通过组织培养可以大大加快其繁殖速度，缩短育种年限，满足现代大规模生产的需要。但关于芍药属植物的离体培养研究多集中于牡丹，芍药的研究近年来虽已有进展，但仍显薄弱，目前国内外研究较少，用的最多的是地下芽的组培，但是其生根移栽困难，且在打破上胚轴休眠、胚苗的诱导、增殖、生根方面存在较大的难题。而芍药胚培养目前还未形成一套完整的体系，不能为芍药的育种和生长提供很好的帮助。

发明内容

针对芍药传统分株繁殖不能满足产业化生产需求，芍药地下芽组培均存在困难的现状，本发明的目的在于提供一种芍药胚培养方法，包括如下步骤：

1）胚的启动培养：获得经灭菌消毒的芍药胚，接种到以Ca²⁺浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0.2-0.5mg/L、萘乙酸的浓度为0-0.05mg/L、赤霉素的浓度为0.1mg/L的培养基上，常规培养；

2）将步骤1）中获得的胚苗，先后进行丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、壮苗生根培养，获得芍药组培苗。

其中，步骤1）所述胚的启动培养，所用培养基优选：以Ca²⁺浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0.2mg/L、萘乙酸的浓度为0.05mg/L、赤霉素的浓度为0.1mg/L的培养基上，或者以Ca²⁺浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0.5mg/L、萘乙酸的浓度为0mg/L、赤霉素的浓度为0.1mg/L的培养基。

其中，步骤1）所述获得经灭菌消毒的芍药胚，具体方法为：将芍药种子剥除种皮后，用洗洁精清洗种子表面的污渍，用1-3%（重量百分比）的NaClO浸泡20-30min，流水冲洗30-40min，用75%（体积百分比）的酒精消毒30s，无菌水冲洗至少一次，再用0.1%（重量百分比）的HgCl₂消毒10min，无菌水冲洗至少一次，去除胚乳，获得经灭菌消毒的芍药胚。

其中，步骤2）所述丛生芽诱导培养，所用培养基为：以Ca²⁺浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、赤霉素0.5mg/L的培养基。

其中，步骤2）所述丛生芽增殖培养，所用培养基为：以Ca²⁺浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤1.0mg/L、赤霉素0-1.0mg/L、激动素0-1.5mg/L的培养基。优选以Ca²⁺浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为1.0mg/L、赤霉素的浓度为1.0mg/L的培养基。

其中，步骤2）所述壮苗生根培养，所用培养基为：以Ca²⁺浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有吲哚乙酸2.0mg/L、活性炭质量百分含量0.2%的培养基。

其中，所述胚的启动培养，培养时间为30天；所述丛生芽诱导培养，培养时间为30-40天；所述丛生芽增殖培养，培养时间为30-40天；所述壮苗生根培育，培养时间为30天。

其中，芍药胚取材时间为9月上旬。

其中，所述常规培养的培养条件为，温度25±2℃，光照时间14小时/天，光照强度1500-2000lx。

其中，所述芍药，为芍药品种粉玉奴、粉莲绒或亳芍。

本发明还提供所述的一种芍药胚培养的方法在芍药繁育中的应用。

本发明的有益效果在于：