[发明专利]一种重组人血管内皮抑制素持续给药系统

说明书

技术领域

本发明涉及重组人血管内皮抑制素持续静脉给药系统技术领域。

背景技术

20世纪60年代，美国哈佛医学院的Folkman博士提出“肿瘤生长依赖血管生长”这一假设，即血管生成在实体瘤生长和转移过程中起着重要的作用，并于1971年提出“饿死肿瘤疗法”理论。为了刺激血管的生成，肿瘤细胞会上调一系列血管生成因子，同时也会产生一些血管生成抑制因子。组织中血管生成表型的开放与关闭将取决于组织局部区域血管生成刺激因子和抑制因子之间的动态平衡（Folkman，J.Nat.MED.1:27-31,1995; Hanahan,D.,et al.Cell.86:353-364,1996）。研究发现内源性的血管生成抑制因子，如血管紧张素（Angiostatin），血管内皮抑制素（Endostatin）等，均能够抑制小鼠体内肿瘤的生长（O’Relly，M.S.,et al.Cell.88:277-285,1997）。

血管内皮抑制素（Endostatin）是O’Relly于1997年从小鼠内皮细胞系EOMAD的培养液中分离得到的一种具有抑制血管内皮细胞作用的物质（O’Relly，M.S.,et al.Cell.88:299-285,1997）。氨基酸序列分析该物质为胶原蛋白ⅩⅦ的羧基末端的降解片段，分子量为20kD左右。

重组人血管内皮抑制素（rhEndosratin）与重组鼠血管内皮抑制素在氨基酸序列上有85%的同源性。1996年美国Entremed公司采用酵母作为表达体系生产了重组人血管内皮抑制素。以重组DNA技术生产，以大肠杆菌为表达系统，表达出的重组人血管内皮抑制素与先前的Endostatin相比较，表达水平更高，疗效更强，并且没有因为附加N端序列而导致体内免疫原性。

但是利用传统的大肠杆菌表达方法得到的重组人血管内皮抑制素难以复性并且易于形成沉淀，而用巴斯德毕赤酵母表达系统所耗费的生产成本巨大，两种方法均未能解决将重组人血管内皮抑制素进行工业生产的问题。为此罗永章等人通过修饰人血管内皮抑制素的核苷酸编码序列，生产出N末端带有附件氨基酸序列的重组人血管内皮抑制素（rhEndostatin,商品名恩度                                               （Endostar））,大大简化了纯化步骤，提高了产物的纯度（ZL00107569.1）。所生产的重组人血管内皮抑制素由192个氨基酸构成，其氨基酸序列为：

MGGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLRHPTWPQKSVWHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIVLCIENSFMTASK

一般来说，目前进入临床研究的重组人血管内皮抑制素均使用静脉给药，或者皮下注射给药。以目前市场销售的恩度注射液为例，其规格为15mg/3ml/支，临床使用时将本品加入250～500ml生理盐水中，匀速静脉点滴，滴注时间3～4小时。本品在与NP化疗方案联合给药时，在治疗周期的第1～14日，每天给药一次，连续给药14天，休息一周，再继续下一治疗周期。通常可进行2～4个治疗周期。显而易见，一方面如此连续滴注14天，休息7天的给药周期，可能会造成体内血药浓度波动过大，无法维持稳态的浓度；另一方面，如此频繁的注射给药，每次滴注时间3～4小时，在生理上给患者带来了巨大痛苦的同时在心理上也给患者带来了巨大的压力，使有些患者在中途就放弃了治疗。

因此，在临床应用中，如果可以通过维持稳态的血药浓度，避免每日单次给药造成的血药浓度波动过大，达到持续抑制肿瘤血管生成，且不增加药物毒性的目的，将给患者带来更大的获益。

鉴于重组人血管内皮抑制素在抗肿瘤药物领域中的重要作用及现有给药系统的缺陷，对于研究合格的重组人血管内皮抑制素持续给药系统是非常必要的。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述缺陷与困难，提供一种较高纯度、简便且可携带的重组人血管内皮抑制素持续给药系统。本发明的另一目的是提供一种该给药系统的持续给药方法。使用该给药系统，一次配液注入以后可持续输注药物数天，且不产生新的杂质、药物纯度达到生物制品的标准，从而大大降低患者生理上的痛苦，提高患者生命质量。